1、一、本文對比研究了化學發(fā)光酶聯(lián)免疫分析(CLEIA)與酶聯(lián)免疫分析(ELISA)技術(shù)檢測水產(chǎn)品中呋喃唑酮代謝物(AOZ)和氯霉素(CAP)殘留。結(jié)果顯示:通過對兩種藥物殘留檢測證明, CLEIA分析方法線性范圍和檢測限均優(yōu)于ELISA分析方法且兩種免疫分析法的添加回收率具有很好的相關(guān)性。CLEIA檢測AOZ檢出限為0.01μg/kg,線性范圍為0.01μg/kg~2.56μg/kg,檢測CAP的檢出限為0.016μg/kg,線性范圍為0

2、.025μg/kg~6.4μg/kg。ELISA法檢測AOZ檢出限為0.1μg/kg,線性范圍為0.1μg/kg~1.62μg/kg;CAP的檢出限為0.05μg/kg,線性范圍為0.05μg/kg~4.05μg/kg。CLEIA法檢測CAP批內(nèi)RSD小于11.3％,批間RSD小于20.9％,檢測AOZ批內(nèi)RSD小于11.1％,批間RSD小于18.3％,符合《獸藥殘留酶聯(lián)免疫試劑(盒)備案參考評判標準》的規(guī)定。
　　二、應(yīng)用CLE

3、IA檢測和監(jiān)測了大連及周邊地區(qū)幾種水產(chǎn)品中CAP和AOZ殘留。結(jié)果如下:
　　(1)在2013年3、6、9和12月采集的樣品中,大連地區(qū)魁蚶、仿刺參、菲律賓蛤仔、大連紫海膽和蝦夷扇貝的食用組織未檢測出呋喃唑酮代謝物(AOZ)。在2013年11月采集的樣品中,莊河、營口和錦州地區(qū)幾種食用貝類中AOZ未超標。
　　(2)大連地區(qū)幾種貝類不同時間檢測結(jié)果顯示,菲律賓蛤仔、魁蚶、蝦夷扇貝三種貝類都不同程度檢測出有氯霉素(CAP)殘留

4、。在3月的采集樣品中,菲律賓蛤仔體內(nèi)CAP平均含量為0.0893μg/kg;魁蚶體內(nèi)CAP平均含量為0.069μg/kg;蝦夷扇貝體內(nèi)CAP平均含量為0.0741μg/kg。在6月的采集樣品中,菲律賓蛤仔體內(nèi) CAP殘留量平均含量為0.0907μg/kg;魁蚶體內(nèi)CAP平均含量為0.061μg/kg;蝦夷扇貝體內(nèi)CAP平均含量為0.0657μg/kg。在9月的采集樣品中,菲律賓蛤仔體內(nèi)CAP殘留量平均含量為0.1166μg/kg;魁蚶體

5、內(nèi)CAP殘留量平均含量為0.0676μg/kg;蝦夷扇貝體內(nèi)CAP平均含量為0.072μg/kg。在12月的采集樣品中,菲律賓蛤仔體內(nèi)CAP殘留量平均含量為0.1444μg/kg;魁蚶體內(nèi)CAP平均含量為0.0693μg/kg;蝦夷扇貝體內(nèi)CAP平均含量為0.076μg/kg。菲律賓蛤仔體內(nèi)CAP殘留量有升高趨勢,魁蚶、蝦夷扇貝含量四季度變化不大。
　　(3)莊河、營口和錦州幾種食用貝類中檢測出有氯霉素殘留,莊河地區(qū)的縊蟶CAP含

6、量為0.201μg/kg,蝦夷扇貝CAP含量為0.108μg/kg,四角蛤蜊CAP含量為0.562μg/kg,紫石房蛤CAP含量為0.229μg/kg,太平洋牡蠣0.435μg/kg。營口地區(qū)的菲律賓蛤仔CAP含量為0.205μg/kg,中國蛤蜊CAP含量為0.298μg/kg,文蛤CAP含量為0.530μg/kg,櫛孔扇貝CAP含量為0.107μg/kg。錦州地區(qū)的中國蛤蜊CAP含量為0.199μg/kg,魁蚶CAP含量為0.105μ

7、g/kg,菲律賓蛤仔CAP含量為0.810μg/kg。莊河地區(qū)的四角蛤蜊和太平洋牡蠣,營口地區(qū)的文蛤,錦州地區(qū)的菲律賓蛤仔等存在氯霉素殘留超標現(xiàn)象。
　　三、建立了一種應(yīng)用分子印跡聚合物替代抗體測定氯霉素的直接競爭酶聯(lián)免疫法。以氯霉素為模板分子,甲基丙烯酸為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑,乙腈為致孔劑,偶氮二異丁腈為引發(fā)劑采用沉淀聚合法合成氯霉素分子印跡聚合物。60℃下聚合反應(yīng)20 h,模板分子、功能單體、交聯(lián)劑的摩爾比為

8、1:4:20,模板分子的物質(zhì)的量為0.25 mmol,溶劑的量為35 ml,引發(fā)劑的量為20 mg時,合成的分子印跡聚合物對氯霉素的吸附效果最佳。合成的氯霉素分子印記聚合物具有高穩(wěn)定性、強的特異吸附性、可重復(fù)使用等特點。將此印記聚合物作為氯霉素的人工抗體代替氯霉素試劑盒中的抗體,并與化學發(fā)光免疫檢測方法聯(lián)用來檢測水產(chǎn)品種氯霉素的殘留量。用0.1％聚乙烯醇甲醇與水溶液將氯霉素分子印跡聚合物固定在96孔板上。采用直接競爭反應(yīng)模式,以辣根過氧