1、背景與目的：
　　頸椎前路椎間融合內(nèi)固定術(shù)（anterior cervical discectomy and fusion，ACDF）長(zhǎng)久以來(lái)一直是治療頸椎疾病的傳統(tǒng)術(shù)式。雖然前路固定鋼板增強(qiáng)了頸椎穩(wěn)定性，但諸如咽喉部異物感、吞咽障礙、鋼板松動(dòng)脫落甚至刺傷食管等內(nèi)固定物并發(fā)癥時(shí)有報(bào)道[1,2]。為了解除傳統(tǒng)鈦合金固定鋼板的潛在危險(xiǎn)，國(guó)內(nèi)外越來(lái)越多的學(xué)者將目光轉(zhuǎn)向生物可吸收材料的研究上。近年來(lái)鎂合金因其在彈性模量、體內(nèi)代謝方面的優(yōu)勢(shì)

2、成為了新型內(nèi)固定材料的研究熱點(diǎn)。生物力學(xué)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)鎂合金頸前路鋼板與傳統(tǒng)鈦合金鋼板具有相似的力學(xué)特性[3,4]。本研究參照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO10993-5與ISO10993-12利用MG-63細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，并觀察MG-63細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原蛋白（collagen typeⅠ，Col-1）、骨鈣素（osteocalcin，OC）、骨橋蛋白（osteopontin，OPN）等成骨因子的表達(dá)變化以及堿性磷酸酶（alkaline phos

3、phatase，ALP）的活性以探討鎂合金前路鋼板的生物相容性以及其對(duì)成骨過(guò)程的影響。
　　材料與方法：
　　按照ISO10993-12將Mg–2wt％Zn合金（由鄭州大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院提供）制備成不同濃度的浸提液（未稀釋時(shí)質(zhì)量體積比為0.2g/ml）。MG-63細(xì)胞復(fù)蘇后加入培養(yǎng)液，靜置于37℃、5%CO2飽和95%濕度條件下培養(yǎng)。將實(shí)驗(yàn)分為2組，空白對(duì)照組：使用未處理的培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)組：使用不同稀釋倍數(shù)的鎂合金浸提液培

4、養(yǎng)基。觀察細(xì)胞形態(tài)定期更換培養(yǎng)液。
　　使用不同稀釋倍數(shù)的浸提液處理細(xì)胞，于第1,2,3天采用CCK-8法檢測(cè)各組內(nèi)光吸收值（OD）以評(píng)估細(xì)胞增殖活性。在10倍稀釋濃度浸提液處理后的第1、3、5、7、9天，以及不同稀釋倍數(shù)的浸提液處理后第5天，采用可見(jiàn)光比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性。于干預(yù)后第5天裂解細(xì)胞利用BCA蛋白試劑盒測(cè)定細(xì)胞內(nèi)蛋白總量。同時(shí)提取蛋白質(zhì)與RNA并采用免疫蛋

5、白印跡技術(shù)（western-blot）與實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)（real-time quantitative PCR）檢測(cè)目標(biāo)蛋白Col-1、OC、OPN與相關(guān)RNA的表達(dá)量，評(píng)估鎂合金對(duì)MG-63細(xì)胞成骨能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1各實(shí)驗(yàn)組CCK-8檢測(cè)結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)組在1x與2.5x稀釋濃度條件下細(xì)胞生存率明顯小于10x以上稀釋濃度組，差異值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。10x稀釋濃度以上分組的細(xì)胞生存率與空白對(duì)照

6、組差異值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。根據(jù) CCK-8結(jié)果計(jì)算72小時(shí) IC50約等于5x稀釋濃度?？赏茰y(cè)出滲透壓和鎂離子濃度與細(xì)胞生存率呈負(fù)相關(guān)，即滲透壓和鎂離子濃度越高，細(xì)胞毒性越大。
　　2各實(shí)驗(yàn)組ALP活性檢測(cè)結(jié)果
　　以不同稀釋倍數(shù)的鎂合金浸提液培養(yǎng)MG-63細(xì)胞1、3、5、7、9天后，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組的細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)堿性磷

7、酸酶表達(dá)均有顯著差異（P＜0.05）。同一時(shí)間點(diǎn)不同稀釋倍數(shù)的堿性磷酸酶表達(dá)均有顯著差異（P＜0.05）。鎂合金浸提液對(duì)ALP的表達(dá)有抑制效應(yīng)，且隨著稀釋倍數(shù)的增大該效應(yīng)逐漸減弱。
　　3各實(shí)驗(yàn)組蛋白總量檢測(cè)結(jié)果
　　在干預(yù)第5天時(shí)，不同稀釋濃度組的蛋白總量均小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），鎂合金浸提液對(duì)蛋白總量的表達(dá)有抑制效應(yīng)，且隨著稀釋倍數(shù)的增大該效應(yīng)逐漸減弱。
　　4各實(shí)驗(yàn)組成骨相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果

8、
　　管家基因GAPDH及目的基因Col-1、OC和OPN mRNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線可。各個(gè)檢測(cè)基因均獲得較好的Ct值，且樣品重復(fù)性好。實(shí)驗(yàn)組Col-1、OC與OPN的mRNA的表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5各實(shí)驗(yàn)組Col-1、OC、OPN蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果
　　以不同稀釋倍數(shù)的鎂合金浸提液培養(yǎng)MG-63細(xì)胞，于第5天裂解細(xì)胞收集蛋白。利用蛋白印跡法（western blot）對(duì)細(xì)胞內(nèi)C