1、目的：
　　 NS2TP基因是抑制性消減雜交技術(SSH)篩選出的HCVNS2反式激活的基因之一。本實驗中，我們對HCV NS2反式激活NS2TP基因從翻譯水平和轉錄水平進行驗證，進而定位NS2TP基因啟動子的核心區(qū)域，并初步探究了NS2TP基因的轉錄調節(jié)機制。
　　 方法：
　　 (1)HCV NS2對 NS2TP基因反式激活作用的驗證。首先，運用pcDNA3.1(-)-NS2表達載體轉染HepG2細胞，以pc

2、DNA3.1(-)為陰性對照組。提取總蛋白、總RNA，然后分別從翻譯水平，即Westem Blot實驗，和轉錄水平，即進行Real-timePCR實驗。分析和研究NS2對NS2TP基因的反式激活作用。
　　 (2)NS2TP基因啟動子的活性分析與核心區(qū)的確定。首先，成功構建pGL4.10-NS2TP啟動子雙熒光素酶報告基因表達載體系統(tǒng)，運用構建的不同截短型載體轉染HepG2細胞，在對啟動子活性進行分析的基礎上，實驗確定了NS2T

3、P基因啟動子活性的核心區(qū)域，同時也分析了NS2對NS2TP基因啟動子的調節(jié)作用。
　　 (3)NS2TP基因轉錄調節(jié)因子CREB作用啟動子核心區(qū)的驗證。運用生物信息學技術分析了啟動子的核心區(qū)，識別CREB因子結合位點，并通過EMSA、ChIP、CREB位點突變、過表達CREB蛋白和特異性抑制CREB實驗，研究轉錄調節(jié)因子CREB是否參與了NS2TP基因的轉錄調節(jié)。
　　 結果：
　　 (1)Real-time P

4、CR實驗證實，HCV NS2上調NS2TP基因的轉錄水平，WesternBlot實驗，證實HCV NS2促進NS2TP的表達。
　　 (2)NS2TP基因最小的啟動子活性區(qū)域位于轉錄起始位點上游257個核苷酸(-257-bp至+93-bp)內，同時我們也驗證了NS2上調NS2TP基因啟動子的活性。
　　 (3)通過EMSA和ChIP，證實CREB為NS2TP基因主要轉錄因子調節(jié)蛋白。CREB位點突變、過表達CREB和特異