β-甘露聚糖酶的生產(chǎn)純化和性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、甘露聚糖是軟木和廣泛分布在植物組織中半纖維素的主要成分。主要的甘露聚糖降解酶是β-甘露聚糖酶、β-甘露糖苷酶和β-葡糖甘酶。β-甘露聚糖酶是起主要作用的水解酶,攻擊甘露聚糖主鏈內(nèi)部的糖苷鍵,釋放短的β-1,4-甘露低聚糖。
  從山東省工業(yè)微生物菌種保藏中心的7株芽孢桿菌為實驗材料,用培養(yǎng)基透明圈法從7種芽孢桿菌中篩選到酶活最高Bacillus subtilis S-88、高龍枯草芽孢桿菌w-0313.83、地衣芽孢桿菌3.83。

2、用測定發(fā)酵液酶活的方法進(jìn)行菌株的復(fù)篩,篩的酶活最高的菌株為Bacillus subtilis S-88且酶活力為907.486mg/mL·min。
  該菌產(chǎn)酶條件進(jìn)行了單因素實驗發(fā)酵條件的優(yōu)化,最優(yōu)產(chǎn)酶條件為:最佳碳源是魔芋粉,含量為4%,最佳有機(jī)氮源為酵母浸粉,最佳無機(jī)氮源為硝酸鈉,經(jīng)過氮源的經(jīng)濟(jì)性評價得到最優(yōu)有機(jī)氮源為玉米黃粉,最優(yōu)無機(jī)氮源為硫酸銨,最佳產(chǎn)酶時間為36h。
  本文用Bacillus subtilis

3、S-88以魔芋粉為底物,生產(chǎn)β-甘露聚糖酶。并通過梯度硫酸銨鹽析、離心、AKTA脫鹽柱脫鹽、陰離子交換樹脂、G-75凝膠電泳等的手段分離得到純化的酶,最終測得比酶活為61697.52IU mL-1。通過SDS-PAGE測得純化得到的為電泳純的蛋白,分子量為30kda且其分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)菌產(chǎn)的β-甘露聚糖酶分子量(50 kda)。
  最后對Bacillus subtilis S-88產(chǎn)的β-甘露聚糖酶的性質(zhì)進(jìn)行了檢測。該酶的最適反

4、應(yīng)溫度為55℃、最適反應(yīng)pH為6.0。細(xì)菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶最適pH多在5.5-7.0之間而該酶在pH4.4-6.8之間比較穩(wěn)定,有比較寬的pH穩(wěn)定范圍,有很好的耐酸性,且該酶的最穩(wěn)定測定pH為6.0。Bacillus subtilis S-88分泌的β-甘露聚糖酶在55℃以下,保溫2 h酶活幾乎不變,55℃時剩余94.87%。因此,該酶的穩(wěn)定溫度是小于55℃。此外,此β-甘露聚糖酶在沸水浴10min以內(nèi)殘余酶活在60%以上,粗酶液需要滅

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