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![基于DNA循環(huán)放大的光學生物傳感器的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/14/18/6888ac9a-8d2f-44f8-8efd-5a49446bb42c/6888ac9a-8d2f-44f8-8efd-5a49446bb42c1.gif)
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文檔簡介
1、本論文的主要內(nèi)容是將DNA循環(huán)放大技術、雜交鏈式反應技術、比色分析技術、化學發(fā)光分析技術與表面增強拉曼檢測技術相結合,研制出高選擇性、高靈敏度的傳感分析方法,對DNA以及生物分子的檢測提供了基礎性研究資料。本文重點介紹了三種傳感分析方法的構建、性質以及其相關應用的研究:
1.本試驗研究了一種新型的基于酶循環(huán)放大和雜交鏈式反應檢測DNA的方法。首先,由于結合了循環(huán)放大技術以及雜交鏈式反應技術雙重放大,使得這種定量檢測目標DNA的
2、方法具有較高的靈敏度和較快的檢測速度,檢測限可達1.0×10-16M;其次,引用了磁性納米微球,有效的降低了背景信號值。最后,反應體系加入標記了親和素的辣根過氧化物酶(HRP),通過親和素與生物素之間的特異性結合,使得它可以跟含有生物素的DNA鏈結合并形成OPDA-H2O2-HRP體系,最終用紫外分光光度計檢測產(chǎn)生的信號。由于所測DNA的含量跟OPDA-H2O2-HRP體系顯色程度有關,并在一定范圍內(nèi)成比例關系,因此可定量的檢測溶液中D
3、NA含量。
2.在結合前期酶循環(huán)放大的工作基礎上,創(chuàng)建了一種基于鄰近連接放大技術(PDCA)的高度靈敏性和選擇性的化學發(fā)光檢測可卡因的方法。其主要的工作原理描述如下:首先,創(chuàng)建了兩條新型的可卡因適體探針,探針分別由三部分組成,包括可卡因適體序列、剪切酶特異性識別序列以及與外加DNA發(fā)卡結構雜交序列。在可卡因以及外加發(fā)卡DNA存在的條件下,這兩條探針可以與之形成特定的復合體結構,當內(nèi)切酶與聚合酶加入時,鄰近連接放大反應被激活,為
4、了更好的降低檢測限,對上述生成的信號DNA又進行了一次酶循環(huán)放大。最終,反應體系加入標記了親和素的辣根過氧化物酶(HRP),使得它可以跟含有生物素的DNA鏈結合并形成Luminol-H2O2-HRP體系,通過luminol-H2O2-HRP流動注射化學發(fā)光檢測化學發(fā)光信號并分析可卡因的量,靈敏度可達到1.0×10-9M。
3.在以上化學發(fā)光可卡因適體傳感器的研究基礎上,引入了表面增強拉曼技術(SERS),創(chuàng)建了一種新型的基于表
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