纖維素酶水解殼聚糖及其磁性固定化工藝研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、殼聚糖與纖維素在結構上存在相似性,纖維素酶對殼聚糖具備水解活力。殼聚糖是一種高分子多糖,其反應體系粘度高,目前研究較多的反應器主要是間歇式液固流化床,對于高粘度體系存在傳質系數低、反應效率差的缺點,將磁場三相流化床應用于高粘度反應液體系,可實現連續(xù)化生產、提高底物降解效率、方便固定化酶的回收。本文研究了可應用于磁場三相流化床的磁性固定化酶載體,選用生物相容性好的淀粉作為磁性高分子顆粒的殼層材料,以磁響應性較好的Fe3O4作為磁核,制備磁

2、性淀粉顆粒。通過吸附、共價結合、交聯等方法將纖維素酶與磁性淀粉載體結合,制備磁性固定化酶顆粒,可以借助外加磁場方便簡單的分離回收。
   首先對游離纖維素酶水解殼聚糖的酶反應條件進行優(yōu)化,采用3,5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測定酶水解液中還原糖含量,選取底物濃度、加酶量及反應時間考察其對酶水解產物的影響,五因素四水平正交實驗得出最佳反應條件為:反應pH5.8,反應溫度55℃,底物濃度20 mg/mL,加酶量100 U/g底物

3、,酶反應時間4 h,薄層層析分析證實有殼寡糖的產生。
   采用共沉淀法制備鐵磁流體,選取氧化磁化法、共沉淀磁化法、反相懸浮交聯法三種不同的磁化工藝制備磁性淀粉,其中反相懸浮交聯法制備所得磁性淀粉顆粒未被氧化,磁響應性好,是一種合適的磁化工藝。其制備工藝條件為:乳化劑濃度2%、交聯溫度40℃、每克淀粉加0.375 g Fe3O4、交聯劑濃度為每克淀粉添加0.3 mL環(huán)氧氯丙烷、交聯反應時間6 h。
   選用吸附-交聯法

4、、碳二亞胺(EDC)交聯法、雙醛(氧化)淀粉共價結合法,在磁性淀粉載體表面固定纖維素酶,結果顯示雙醛(氧化)淀粉共價結合法制備所得磁性固定化酶的酶活回收率較高,并得出雙醛(氧化)磁性淀粉固定化纖維素酶的反應條件為:10℃、pH6.5、加酶量10 μL、反應20 h。
   對磁性固定化酶的酶學性質進行研究,結果表明:與游離纖維素酶比較,經過磁性淀粉固定化后,纖維素酶的熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性得到提高,固定化酶重復使用三次后其酶活回收

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