1、酶解法制備殼寡糖所用的酶一般分為專一性酶和非專一性酶，綠色木霉纖維素酶是非專一性酶中的一種優(yōu)良酶制劑。該酶可水解殼聚糖得到聚合度為5～8的高生物活性的殼寡糖，因此采用綠色木霉發(fā)酵獲得纖維素酶，并用于制備高活性殼寡糖。
　　 本文以產(chǎn)酸性纖維素酶菌株綠色木霉Trichoderma viride Y-19為出發(fā)菌株(殼聚糖酶活為0.2001U/mL)，經(jīng)紫外線、亞硝基胍(NTG)多次誘變和自然篩選相結(jié)合的方法，篩選到一株遺傳特性穩(wěn)定

2、的高產(chǎn)突變菌株XY-131。此突變株的殼聚糖酶活提高到0.403IU/mL。
　　 對(duì)綠色木霉XY-131產(chǎn)纖維素酶的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面方法，并借助Design Expert7.1.3軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為:Avicel2.56%，玉米芯1.03%，棉籽餅粉4.79%，麩皮0，5%，KH2PO40，2%，(NH4)2SO40.2%，CaCl20.03%，MgS

3、O40.03%。并確定了其搖瓶發(fā)酵條件:初始pH5.5，溫度30℃，接種量10%(v/v)，裝液量75mL/250mL，轉(zhuǎn)速160r/min，培養(yǎng)48h后加入0.1g/100mL的Tween-60。優(yōu)化后酶活可達(dá)到2.38IU/mL。在此基礎(chǔ)上，用30L發(fā)酵罐進(jìn)行放大試驗(yàn)，30℃培養(yǎng)5天，測(cè)得的殼聚糖酶活為2.68IU/mL。
　　 采用板框過(guò)濾、超濾濃縮、無(wú)水乙醇沉淀和冷凍干燥，對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行了提取濃縮。固體酶總收率為41%，液