1、磺胺喹惡啉(Sulfaquinoxaline，SQ)是一種高效抗球蟲(chóng)劑和抗菌劑，主要用于治療家禽、反芻幼畜及小動(dòng)物的球蟲(chóng)病。養(yǎng)殖場(chǎng)為防治和治療動(dòng)物疾病常在動(dòng)物飼料或飲用水中加入磺胺喹惡啉，常導(dǎo)致畜禽急慢性中毒和畜禽制品的藥物殘留，人經(jīng)常低劑量攝入含有磺胺喹惡啉殘留的動(dòng)物源性食品，當(dāng)它在體內(nèi)富集達(dá)一定濃度時(shí)，可造成變態(tài)反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)，甚至致畸、致癌作用。因此各國(guó)都比較重視其殘留的檢測(cè)問(wèn)題，中國(guó)及歐盟、日本、美國(guó)等西方發(fā)達(dá)國(guó)家規(guī)定磺胺喹惡啉

2、殘留限量為100ng/g。目前，在藥殘檢測(cè)領(lǐng)域，免疫學(xué)分析方法因其操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本低、可實(shí)現(xiàn)批量檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)已成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。本研究旨在建立磺胺喹惡啉殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)方法，以方便養(yǎng)殖戶(hù)自檢，并為有效監(jiān)管磺胺喹惡啉的使用及殘留情況提供更好的研究依據(jù)。
　　 本研究依據(jù)磺胺喹惡啉與載體蛋白(BSA、OVA)的分子結(jié)構(gòu)，采用重氮化法合成免疫原原BSA-SQ，進(jìn)而制備單克隆抗體，最終成功研制出磺

3、胺喹惡啉直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA快速檢測(cè)試劑盒。主要研究成果如下：
　　 1.磺胺喹惡啉完全抗原的制備及鑒定
　　 分別用戊二醛(GA)法、碳二亞胺(EDC)法、重氮化法探索人工抗原BSA-SQ的制備，并用紫外掃描(UV)、SDS-PAGE電泳對(duì)其進(jìn)行初步鑒定。結(jié)果表明：采用GA法與EDC法制得的BSA-SQ偶聯(lián)效果不理想，用重氮化法制備BSA-SQ效果較好。將重氮化法制備的人工抗原BSA-SQ免疫BALB/C小鼠，獲得了高價(jià)

4、、敏感的抗磺胺喹惡啉多克隆抗體(pAb)，確定重氮化法制備人工抗原BSA-SQ獲得成功。
　　 2.磺胺喹惡啉單克隆抗體的制備及免疫學(xué)特性的鑒定
　　 經(jīng)BSA-SQ免疫產(chǎn)生多抗的BABL/C小鼠，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)實(shí)驗(yàn)篩選出細(xì)胞融合備用小鼠1只；超免后，將其脾細(xì)胞與NS0瘤細(xì)胞用PEG4000進(jìn)行細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)液篩選培養(yǎng)；有限稀釋法進(jìn)行3次克隆化，獲得了3株產(chǎn)磺胺喹惡啉單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細(xì)

5、胞株1H8-B11、1H8-C6、1H8-F5；采用體內(nèi)誘生腹水法大量生產(chǎn)后純化。經(jīng)鑒定，1H8-B11、1H8-C6、1H8-F5細(xì)胞培養(yǎng)上清間接ELISA效價(jià)分別為1:1.92×102、1:1.92×102、1:3.84×102，腹水效價(jià)分別為1:2.0×105、1:2.0×105、1:2.56×105，親和力測(cè)定表明細(xì)胞株1H8-F5親和常數(shù)(Ka)最高，為4.19×109 L/moL，阻斷ELISA測(cè)定其SQ IC50為13.1

6、ng/mL，與磺胺氯吡嗪鈉的交叉反應(yīng)率(CR)為20[％]，與其他同類(lèi)化合物無(wú)CR。
　　 3.磺胺喹惡啉的酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)方法的建立
　　 在制得SQ mAb的基礎(chǔ)上，依據(jù)直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)原理，組裝制備了SQ殘留快速檢測(cè)直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒(SQ-Kit)。SQ-Kit標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y＝-0.262x＋0.6778，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9786，SQ IC50為7.5ng/mL，檢測(cè)下限為5.0ng/mL。