磺胺氯吡嗪?jiǎn)慰寺】贵w的制備.pdf_第1頁(yè)
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1、磺胺藥抗菌譜廣,是目前應(yīng)用比較廣泛的一類抗菌藥,人們?cè)趯?shí)際生產(chǎn)中不合理地使用磺胺類藥物,會(huì)使其殘留在動(dòng)物性食品中,對(duì)人類身體健康造成危害。世界上很多國(guó)家都對(duì)食品中磺胺類藥物作了最高殘留限量( MRL)的規(guī)定,有的國(guó)家甚至規(guī)定不得檢出磺胺類藥物。目前,在獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)中免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、快速、方便簡(jiǎn)捷的特點(diǎn),適宜現(xiàn)場(chǎng)篩選和大量樣品快速分析,免疫分析技術(shù)的核心是單克隆抗體,本研究目的在于制備磺胺氯吡嗪(SPZ)人工抗原,利用單克隆

2、抗體技術(shù)建立能分泌抗磺胺氯吡嗪?jiǎn)慰寺】贵w的雜交瘤細(xì)胞株,為建立其免疫學(xué)快速檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)。
  本研究采用重氮化法將 SPZ分別偶聯(lián)于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫抗原 BSA-SPZ和檢測(cè)抗原 OVA-SPZ,通過紫外掃描分析,掃描結(jié)果表明完全抗原與載體蛋白相比紫外吸收峰發(fā)生漂移,峰值發(fā)生改變,初步證實(shí)完全抗原合成成功;通過 SDS-PAGE電泳法完全抗原進(jìn)行了分析,載體蛋白的遷移速度大于完全抗原,載體

3、蛋白泳動(dòng)條帶略低于完全抗原,說明完全抗原的分子量大于載體蛋白,進(jìn)一步表明完全抗原偶聯(lián)成功;對(duì)抗原進(jìn)行了免疫檢測(cè),第2次免疫后經(jīng)10 d斷尾采血,取血清間接ELISA法測(cè)定小鼠血清效價(jià)。結(jié)果表明,1號(hào)和2號(hào)小鼠的血清效價(jià)都可達(dá)到 l:4000,進(jìn)一步說明偶聯(lián)成功;綜上可表明免疫抗原 BSA-SPZ及檢測(cè)抗原 OVA-SPZ適合用于免疫及后續(xù)的抗體制備。
  用合成的人工抗原 BSA-SPZ免疫 BALB/c小鼠,通過檢測(cè)血清效價(jià)篩選

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