乳品中金黃色葡萄球菌腸毒素A的免疫磁珠富集與量子點標記檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一種常見的食源性致病菌,易于在含有豐富蛋白質和水分以及淀粉含量高的食品中快速繁殖,其產生的金黃色葡萄球菌腸毒素(Staphylococcal enterotoxin,SE)又是其重要的致病因子。為了滿足食品中致病微生物特異、快速地檢出與監(jiān)測的要求。本論文將納米磁珠和量子點與傳統(tǒng)的免疫方法相結合,利用磁珠的富集作用與量子點的標記,研究出高特異性、高靈敏度的檢測平臺。研究結論如下

2、:
  1安徽不同地區(qū)奶牛場牛奶中金黃色葡萄球菌及其腸毒素污染狀況評估從安徽省不同地區(qū)的30所奶牛場采集乳樣,進行乳源性金黃色葡萄球菌的分離與生化鑒定,并采用PCR技術對分離出的菌株進行金黃色葡萄球菌腸毒素血清型鑒定。通過對各個基因型進行分類比較后得出:乳樣中共分離出5株金黃色葡萄球菌,占總比例的16.7%,血清型主要為A、C型,屬于中度污染。
  2乳源性金黃色葡萄球菌腸毒素A的間接ELISA檢測根據(jù)已獲得的評估結果,從乳

3、樣中分離出金黃色葡萄球菌腸毒素A。經純化鑒定后,利用其作為免疫原,對獺兔進行常規(guī)的免疫注射,獲得較高純度的金黃色葡萄球菌腸毒素特異性抗血清后,建立乳源金黃色葡萄球菌腸毒素間接ELISA檢測方法。其線性檢測范圍為1-103 ng/mL,回收率在98.9861%-103.3475%之間,可用于實際測量。
  3金黃色葡萄球菌腸毒素A多克隆抗體免疫磁珠的制備利用油酸法獲得分散性好、羧基化、粒徑為10nm左右的磁性納米粒子,并進一步用ED

4、C法活化。然后,將獲得的金黃色葡萄球菌腸毒素抗體與納米磁珠進行偶聯(lián),制備免疫磁珠,在抗體濃度在2 mg/mL時能獲得最大固化率。
  4羧基熒光量子點的制備及其與抗體偶聯(lián)條件的篩選通過控制回流反應時間在4h,反應體系pH值在10,制備出熒光強度較高,光穩(wěn)定性好的羧基CdSe量子點,并對其熒光性能進行表征。用EDC法活化量子點并使其與抗體偶聯(lián),得到具有量子點標記的金黃色葡萄球菌腸毒素特異性抗血清。
  5金黃色葡萄球菌腸毒素A

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