1、目的:
　　 Proliferin related protein(PRP)最初被認為是小鼠胎盤血管生成抑制因子,據(jù)文獻報道PRP僅表達于雌性胎盤組織。因此,盡管此基因發(fā)現(xiàn)至今已有20多年,但一直被排除在雄性之外,直接的實驗研究僅見于幾篇文獻報道。我們在前期實驗中偶然發(fā)現(xiàn)PRP表達于睪丸,因此本研究擬探索PRP在睪丸中的表達定位,PRP是否在雄性動物表達,及其在雄性生殖功能中的作用,PRP對人類腫瘤細胞生長的影響。
　　

2、 方法:
　　 采用原位雜交和免疫組化方法對PRP進行組織學定位,Real-TimeRT-PCR方法研究PRP在大鼠睪丸表達水平與年齡的關系以及人參皂苷對PRP表達的影響。
　　 利用BLOCK-iTTM HiPerformTM Lentiviral PolⅡ miR RNAiExpression System with EmGFP試劑盒制備和包裝PRP-RNAi慢病毒,以miRNA方式干擾PRP表達。用Real-Tim

3、e RT-PCR方法檢測PRP沉默后對睪酮分泌相關基因的影響,及對HCG誘導睪酮分泌是否有影響,ELISA方法檢測細胞睪酮產(chǎn)生情況。
　　 構(gòu)建PRP基因熒光表達載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染TM3細胞,流式細胞術分析TM3細胞周期分布。為了研究PRP對腫瘤細胞生長和增殖的影響,轉(zhuǎn)染SGC-7901腫瘤細胞,分析腫瘤細胞增殖改變和周期分布。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組化和原位雜交結(jié)果顯示PRP陽性免疫染色位于睪丸間質(zhì)細胞。

4、免疫熒光染色顯示PRP在TM3細胞胞漿中表達。
　　 2 PRP在大鼠睪丸中的表達模式為隨年齡增加而增加。有趣的是,人參皂苷可以顯著下調(diào)老年大鼠睪丸PRP表達水平。HCG通過PKA途徑顯著上調(diào)TM3細胞中PRP表達水平。
　　 3慢病毒介導PRP沉默減弱HCG刺激睪酮產(chǎn)生的作用。另外,PRP沉默后抑制HCG刺激PRLR mRNA增加的作用,且PRL促進HCG誘導睪酮產(chǎn)生的作用也因為PRP沉默而減弱,表明了PRP可能通過影