1、肺癌是全世界范圍內(nèi)導致死亡最主要的癌癥之一。研究肺癌與相關生物分子的關系對于深入探討腫瘤的診治及發(fā)生發(fā)展意義重大。近年來microRNA(miRNA)作為一類內(nèi)源性小的非編碼的調控RNA備受關注。大量的實驗表明miRNA的表達調控與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關，諸多與肺癌相關的miRNA的異常表達也被大量的研究所證實，該特異性miRNA最直接的研究來源則是肺癌組織，而且不同類型的肺癌組織中miRNA的表達也不盡相同。然而miRNA作為重要的調

2、控分子如何發(fā)揮作用的，以及其在腫瘤組織，癌旁組織和正常組織中表達水平的差異情況和變化規(guī)律如何，目前相關的報道還很少。
　　在眾多miRNA的檢測分析方法當中，northern blotting、實時熒光定量PCR等傳統(tǒng)的分子生物學技術以及基因芯片和新一代高通量測序等并行檢測技術都已經(jīng)被大量的應用。而其中定量PCR技術應用最為廣泛，在單個miRNA表達水平檢測，差異表達miRNA的驗證分析以及進一步功能探討中都有涉及，因此針對miR

3、NA的定量PCR檢測方法也成為當前miRNA研究的一個重要方面。發(fā)展優(yōu)化針對miRNA的定量PCR檢測方法意義重大。
　　鑒于miRNA及其在肺癌中研究的現(xiàn)狀，本論文首先利用新一代高通量測序技術對肺癌病人癌組織，癌旁組織和正常組織進行了miRNA表達譜的篩選;隨后針對miRNA定量檢測中存在的一些問題發(fā)展了一種通用的定量PCR檢測方法，并對測序篩選出來的差異表達的miRNA進行了驗證分析。本論文的主要研究內(nèi)容如下:
　　1、

4、肺癌組織miRNA表達譜的篩選:我們利用新一代高通量測序技術對肺鱗癌病人癌組織，癌旁組織和正常組織中的miRNA進行了全基因組水平上的測序。測序結果發(fā)現(xiàn)癌癥樣本、癌旁樣本及正常樣本中分別檢測出了226，207和137種microRNAs，其中三類樣本中共表達的miRNA有132種。統(tǒng)計分析結果顯示相對于正常組織而言，癌組織中發(fā)現(xiàn)有58種顯著差異表達的miRNA;而癌旁組織中有37種顯著差異表達的miRNAs。部分差異表達的miRNA在定

5、量PCR檢測中得到了驗證。靶基因預測結果顯示，大多數(shù)靶基因都參與RNA轉錄過程的調控、細胞周期的調控等相關過程。KEGG信號通路分析結果可以看出，絕大多數(shù)差異表達的miRNA所調控的靶基因均參與腫瘤相關的信號調控通路。
　　2、通用miRNA定量PCR方法的研究及應用:該方案針對當前miRNA定量檢測中引物探針等設計復雜、費用較高、步驟繁瑣等問題提出并發(fā)展了一種以隨機的預腺苷酸化接頭的連接為基礎通用miRNA定量方法。該方案以mi