利用人體腸道菌發(fā)酵豆芽制備雌馬酚的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雌馬酚是大豆異黃酮重要的代謝終產(chǎn)物,由黃豆苷元在體內(nèi)某些特定腸道菌的作用下特異性代謝得到,具有較異黃酮前體更高的生物活性,并且性質(zhì)穩(wěn)定,容易被人體吸收。臨床數(shù)據(jù)表明,雌馬酚具有預防乳腺癌、預防心血管疾病、骨質(zhì)疏松,改善更年期綜合征,保護神經(jīng)以及抗衰老等方面有重要的功效。
   雌馬酚的產(chǎn)出受到多種因素的影響,包括宿主基因,飲食習慣,藥物作用等方面。本實驗利用兩名雌馬酚產(chǎn)生者的菌群進行體外代謝,探討了十種常見抗生素對于雌馬酚代謝產(chǎn)

2、生的影響,發(fā)現(xiàn)鹽酸環(huán)丙沙星對雌馬酚產(chǎn)出抑制作用最小,頭孢曲松、鹽酸多西環(huán)素以及土霉素基本完全抑制,其他抗生素對于兩個這來源的菌群作用存在差異。
   本實驗室課題組在前期工作中已成功地從女性體內(nèi)篩選到兩株可產(chǎn)生雌馬酚的腸道菌,分別為屎腸球菌HY-1,以及Slackia屬菌株HY-2,本實驗以提高兩株菌代謝產(chǎn)出雌馬酚的能力為目的,對HY-1、HY-2的培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化,并且在BHI培養(yǎng)基的基礎上對培養(yǎng)基成分進行調(diào)整,通過兩株菌轉(zhuǎn)

3、化黃豆苷元的特性,利用豆芽發(fā)酵,進行雌馬酚粗提取工藝的研究。
   首先對HY-1,HY-2純培養(yǎng)與混合培養(yǎng)方式中雌馬酚的產(chǎn)量進行比較,發(fā)現(xiàn)混合培養(yǎng)后雌馬酚的產(chǎn)量有所提高,確定混合培養(yǎng)兩株菌的接種比例,通過單因素實驗對混合培養(yǎng)的生長條件進行篩選,并且利用正交實驗優(yōu)化,優(yōu)化后得到的最佳生長條件為:HY-1,HY-2以1∶1的比例接種,接種量為4%,培養(yǎng)基初始PH值為7.0,發(fā)酵溫度為38℃。未優(yōu)化前,HY-1單獨培養(yǎng)產(chǎn)量為0.25

4、μg/mL、0.361μg/mL,優(yōu)化后得到雌馬酚濃度為0.6μg/mL,濃度分別提高了1.31倍、0.67倍。
   以BHI培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基,通過單因子實驗,對補充的碳源、氮源、無機鹽及生長因子初步篩選,得到能夠提高雌馬酚產(chǎn)量的影響因素,采用Plackett-Burman設計對影響因素進行考察,確定乳糖、檸檬酸、硝酸鈉對菌株產(chǎn)生雌馬酚的影響顯著。利用最陡爬坡實驗確定出顯著因素的最佳取值區(qū)域,采用Box-Benhnken中

5、心組合實驗設計及響應面分析確定最佳條件。結(jié)果表明,補充最佳培養(yǎng)基的組成為:BHI腦心浸液38g/L,乳糖2.59g/L,檸檬酸1.48 g/L,硝酸銨1.26 g/L.硫酸銨1.25 g/L,磷酸氫二鉀0.5 g/L,硫酸二氫鉀0.4 g/L,L-半胱氨酸0.06 g/L,驗證實驗得到雌馬酚濃度為1.47μg/mL,較未優(yōu)化前提高了1.45倍。
   以實驗得到的最佳培養(yǎng)基組成及最佳生長條件為基礎,利用HY-1、HY-2對豆芽粉

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