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![液體發(fā)酵生產(chǎn)樺褐孔菌菌絲體及活性成分的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/16/16/b579dd5c-b306-4f9f-9e6b-26042b374f46/b579dd5c-b306-4f9f-9e6b-26042b374f461.gif)
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1、樺褐孔菌(Inonotusobliquus),是珍稀的大型藥用真菌,在俄羅斯已有一百多年的應(yīng)用歷史,能治療多種疾病。具有抗腫瘤、降血糖、抗病毒、增強(qiáng)免疫和抗氧化、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用。為得到大量樺褐孔菌菌體及活性成分,本論文首先從實(shí)驗(yàn)室保存的兩株菌株中確定了一株出發(fā)菌株,研究了高產(chǎn)胞內(nèi)、外多糖的液體培養(yǎng)條件,并對(duì)胞內(nèi)多糖和三萜化合物提取工藝進(jìn)行了研究,最后對(duì)多糖的性質(zhì)進(jìn)行初步的鑒定。結(jié)果如下: 1.通過對(duì)樺褐孔菌W和D菌株的篩
2、選,發(fā)現(xiàn)D菌株生長(zhǎng)快,菌絲致密,多糖產(chǎn)量高,同時(shí)對(duì)其菌落形態(tài)和菌絲形態(tài)進(jìn)行了比較,確定菌株D為出發(fā)菌株。并且通過正交試驗(yàn)得到樺褐孔菌D菌株的液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基組成為:葡萄糖2.5%,麩皮0.7%,玉米粉0.8%,黃豆粉1%,酵母粉0.4%,磷酸二氫鉀0.1%,硫酸鎂0.05%,培養(yǎng)基的起始pH6.0。最佳液體搖瓶培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度28℃,裝液量100mL/250mL,接種量10%(V/V),轉(zhuǎn)速為160r/min,最佳培養(yǎng)時(shí)間10天。
3、在此培養(yǎng)條件下樺褐孔菌菌體為蓬松、絨毛狀的菌球,并且有利于菌體生長(zhǎng)和多糖代謝,其最大菌體干重、胞外多糖、胞內(nèi)多糖分別為41.12g/L、5.95g/L、2.93g/L。 2.正交試驗(yàn)優(yōu)化得到了胞內(nèi)多糖最佳的提取條件為:水料比40:1,提取溫度80℃,提取時(shí)間2h,提取次數(shù)2次,3倍體積的75%乙醇沉淀,醇沉溫度4℃時(shí),此時(shí)胞內(nèi)多糖提取率為59.5mg/g。 另外通過單因素試驗(yàn)確定了樺褐孔菌三萜化合物的最佳提取工藝參數(shù)為:
4、提取溶劑采用異丙醇,溶劑用量為80mL/g,提取時(shí)間為2h,提取溫度為80℃。樺褐孔菌三萜最高提取率達(dá)到8.85%。 3.對(duì)樺褐孔菌胞內(nèi)、外多糖的性質(zhì)進(jìn)行了初步鑒定,其中胞內(nèi)總糖含量為59.95%、肽含量為23.81%,單糖含量0.26%;胞外總糖含量為62.86%、肽含量24.51%、單糖含量0.31%。經(jīng)HPGFC檢測(cè)到樺褐孔菌胞內(nèi)、外多糖的有效成分峰的分子量分別為762.801KDa和953.005KDa,歸一化含量分別為
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