1、本論文研究了黑根霉(Rhizopus nigricans)生物催化甾體的C11α羥基化反應?？疾炝怂喟l(fā)酵體系下轉(zhuǎn)化條件對黑根霉轉(zhuǎn)化效果的影響，重點構(gòu)建了一個適合黑根霉生物催化甾體C11α-羥基化的兩相體系以及研究了固定化技術(shù)在兩相發(fā)酵體系中的應用。對比了黑根霉對三種甾體底物轉(zhuǎn)化能力的差異。
　　 首先，研究了水相培養(yǎng)條件對黑根霉菌體生長狀態(tài)的影響，同時對比了不同菌體形態(tài)對轉(zhuǎn)化效率的差別，發(fā)現(xiàn)帶有絨毛狀菌絲的菌球轉(zhuǎn)化效果最好。成

2、球條件為孢子接種濃度為107個孢子/mL，發(fā)酵溫度28℃，轉(zhuǎn)速為150 r/min。從發(fā)酵過程曲線和轉(zhuǎn)化過程來看，前8h為延滯期，9～22h為對數(shù)生長期，在第22h發(fā)酵液pH降到了3.8，溶氧降到10％，菌體培養(yǎng)成熟，此時為投入底物的最佳時期，轉(zhuǎn)化的第44h為轉(zhuǎn)化終止時間。而250mL三角瓶裝液量為50mL，投料濃度為2％，轉(zhuǎn)化pH4.6為最佳的轉(zhuǎn)化條件。水相發(fā)酵體系下的羥化酶誘導實驗確定了0.2％的底物誘導濃度，誘導菌齡為16h，誘導

3、時長為8h。從助溶劑和表面活性劑角度看，吐溫-80的效果最好，底物經(jīng)吐溫-80處理后最終轉(zhuǎn)化率比對照提高了18％，甲醇的效果比乙醇好，甲醇的最佳添加量為4％。
　　 其次，重點研究了兩相轉(zhuǎn)化體系的建立。從有機溶劑的對甾體的溶解度、對黑根霉細胞的毒性和最終的轉(zhuǎn)化效果來看，乙酸丁酯足作為有機相的最佳選擇。優(yōu)化了此體系的最佳轉(zhuǎn)化條件，乙酸丁酯相與發(fā)酵液相的體積比為1:5，最適轉(zhuǎn)化溫度為25℃。而從不同的水相對比來看，發(fā)酵液比緩沖液和無

4、菌水的效果都好。之后考察了氧促進劑H2O2和外電子受體維生素K3對C11α-羥基化轉(zhuǎn)化率的影響方面，前者的最佳添加量為1％，比對照體系轉(zhuǎn)化率提高了8％；后者的最佳添加量為0.1％，比對照體系轉(zhuǎn)化率提高了6％。從底物的角度看，黑根霉催化16α，17α-環(huán)氧黃體酮11α羥基化的效率最高。
　　 最后，研究了固定化細胞在兩相體系中的應用。從選擇的3種固定化方法來看，海藻酸鈣包埋法的效果最好。雖然轉(zhuǎn)化率并沒有比游離體系有所提高，但是酶活