1、人巨細(xì)胞病毒屬β皰疹病毒亞科，它在人群中感染非常普遍。在成年的健康人群中HCMV的感染呈現(xiàn)不顯性臨床癥狀，但對(duì)于免疫抑制人群能造成嚴(yán)重疾病，甚至導(dǎo)致生命的危險(xiǎn)。目前HCMV臨床檢測手段并不完善，也沒有一種有效的疫苗能夠預(yù)防病毒的感染。 本實(shí)驗(yàn)以噬菌體展示技術(shù)為手段，以標(biāo)準(zhǔn)羊抗HCMV多抗為靶標(biāo)，通過正常山羊IgG抗體消減篩選到一個(gè)gM抗原表位CMVMME，核心序列為Ⅹ-ⅩⅩⅩⅩ(由于專利問題序列未公開)。經(jīng)計(jì)算機(jī)分析及Blast

2、搜索，CMVMME與gM蛋白某一肽段高度同源；Western Blot方法證實(shí)鼠抗CMVMME抗體不僅能夠特異結(jié)合HCMV病毒粒子，也能特異結(jié)合重組表達(dá)的gM多肽。表明CMVMME是gM的一個(gè)線性表位。 為初步研究單氨基酸突變對(duì)CMVMME結(jié)合抗體活性的影響，將CMVMME中的關(guān)鍵氨基酸人工單突變?yōu)楦拾彼?，ELISA和western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)將谷氨酰胺突變?yōu)楦拾彼岷?，CMVMME結(jié)合HCMV多抗的活性明顯下降，而其它氨基

3、酸單突變后CMVMME活性未見明顯變化。提示單氨基酸突變時(shí)谷氨酰胺殘基影響著CMVMME特異結(jié)合HCMV多抗的活性。 為證實(shí)鼠抗CMVMME多抗具有中和抗體性質(zhì)，通過病毒中和實(shí)驗(yàn)，分別用50 μg標(biāo)準(zhǔn)HCMV多抗B65275G、鼠抗CMVMME抗體、正常小鼠抗體和正常山羊抗體處理50TCID<,50>HCMV病毒，發(fā)現(xiàn)用鼠抗CMVMME抗體處理后的病毒的感染能力大大降低；用FITC標(biāo)記病毒即刻早期蛋白表達(dá)的方法發(fā)現(xiàn)分子量為68K

4、D的病毒即刻早期蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)數(shù)量明顯減少。標(biāo)準(zhǔn)羊抗HCMV多抗B65275G幾乎完全抑制了病毒的侵入，而正常小鼠抗體和正常山羊抗體處理的病毒與不加任何抗體處理的病毒感染能力無明顯變化，表明鼠抗CMVMME多抗是一種具有中和作用的抗體，它能在一定程度上阻斷HCMV對(duì)細(xì)胞的侵襲。 為了驗(yàn)證CMVMME與HCMV感染的人血清之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，首先采用兩個(gè)不同生物公司生產(chǎn)的HCMV IgG ELISA檢測試劑盒分別與40份人血

5、清反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)有8份血清均為HCMV IgG陽性。在這8份IgG陽性人血清中，重組表達(dá)的已知的gB抗原表位區(qū)ADl能夠與5份血清反應(yīng)，AD2能夠與6份血清反應(yīng)，CMVMME能夠與3份血清發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。將AD1、AD2和CMVMME混合則有7份血清與之反應(yīng)，表明三種抗原與HCMV抗體反應(yīng)具有一定的互補(bǔ)性。 本研究在HCMV診斷和預(yù)防研究上進(jìn)行了摸索和探討，取得了一定的結(jié)果，這將為進(jìn)一步研究診斷和預(yù)防HCMV的試劑打下良好的基礎(chǔ)