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![豬血中超氧化物歧化酶(SOD)和血紅素的提取及SOD的應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/14/18/638226d4-1866-4d77-9a61-607e29adcf15/638226d4-1866-4d77-9a61-607e29adcf151.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、我國(guó)豬血資源非常豐富,豬血的蛋白質(zhì)含量高、氨基酸組成平衡,是優(yōu)質(zhì)的蛋白來(lái)源。豬血中以紅細(xì)胞為主,紅細(xì)胞中最主要的蛋白是血紅蛋白,含量占血細(xì)胞蛋白總量的90%以上。開(kāi)發(fā)豬血資源不僅可增加蛋白質(zhì)飼料來(lái)源、增加用于食品、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的原料資源,又可減少屠宰廢棄物對(duì)環(huán)境的污染,具有很好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。本論文以豬血為原料提取SOD和血紅素,進(jìn)行初步鑒定、儲(chǔ)存過(guò)程中的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),并對(duì)SOD的體外抗氧化活性及其對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響進(jìn)行研究。
2、 1SOD和血紅素提取工藝條件的優(yōu)化采用超聲波破碎細(xì)胞膜,SOD比活力和血紅素提取率都較高的超聲條件為:超聲功率70W、超聲時(shí)間15min及超聲溫度40℃;利用Box-Behnken的中心組合旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn),Design-Expert軟件處理數(shù)據(jù),得出SOD的最佳提取條件:熱變溫度65.2℃、熱變時(shí)間26.1min、0.1mol/L氯化銅添加0.423mL/15mL溶血液;血紅素的最佳提取條件為:酸性丙酮添加量為血紅蛋白的5.66倍,
3、酸酮比為3%,抽提時(shí)間為42.00min時(shí)血紅素提取率達(dá)到最大值為0.225g/100mL。
2SOD和血紅素的初步鑒定SOD提取樣品的紫外光譜分析最大吸收峰為265nm,與文獻(xiàn)報(bào)道一致;血紅素標(biāo)品和樣品進(jìn)行紫外光譜、紅外圖譜和高效液相色譜分析確定提取物為血紅素。選擇甲醇:水為80:20,在所選流動(dòng)相和儀器條件下,檢出限、精密度和穩(wěn)定性均良好,血紅素的純度為72%。
3SOD和血紅素的儲(chǔ)存穩(wěn)定性研究SOD和血
4、紅素在儲(chǔ)存過(guò)程中,冷凍保存有利于SOD和血紅素的穩(wěn)定。儲(chǔ)存20d時(shí),冷凍保存SOD的相對(duì)活力為90%,冷藏保存相對(duì)活力為85%,室溫避光保存為82%,室溫光照相對(duì)活力為80.25%;儲(chǔ)存9周后,冷凍保存的血紅素相對(duì)含量為91.58%,冷藏保存、室溫避光保存和室溫光照保存的相對(duì)含量分別為88.61%、83.46%和81.75%。
4SOD的體外抗氧化活性及對(duì)小鼠荷瘤sp2/0細(xì)胞凋亡的影響SOD的體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中以Vc作為對(duì)
5、照品,檢測(cè)SOD的體外抗氧化活性,由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知SOD有一定的抗氧化活性,但其抗氧化活性比同濃度的Vc低。
采用研究細(xì)胞凋亡的最基本的方法:凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察。由本實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)未加SOD的小鼠荷瘤sp2/0細(xì)胞生長(zhǎng)良好,表現(xiàn)為圓形;經(jīng)不同濃度SOD作用一段時(shí)間后的小鼠荷瘤sp2/0細(xì)胞其細(xì)胞核明顯固縮、碎裂,表現(xiàn)為凋亡形態(tài),且隨著作用濃度的增加,細(xì)胞核固縮碎裂的程度增加。SOD在體外可在一定程度上抑制小鼠荷瘤sp2/0細(xì)胞的
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