1、木聚糖是自然界存在的可再生的一種植物成分。木聚糖酶能降解木聚糖成木糖或木寡糖，在飼料、造紙、食品以及能源工業(yè)中有著廣泛的用途。木聚糖酶及木聚糖酶基因的研究是當前酶學研究熱點之一。目前主要集中在高產(chǎn)菌株的選育及木聚糖酶基因的克隆和表達研究上。本研究對黑曲霉MC062的木聚糖酶基因進行了克隆與釀酒酵母表達。主要研究結(jié)果如下： 從真菌黑曲霉中提取mRNA合成cDNA的第一條鏈，用PCR方法擴增得到一個編碼endo—β—1，4—xyla

2、nase的基因——XYN7。利用簡便的RT—PCR方法克隆的木聚糖酶基因?qū)儆贕/11家族。該cDNA序列與南非和波蘭科學家克隆到的序列非常相似。 cDNA片段的核酸序列含有一個631bp的開放閱讀框，編碼210個氨基酸殘基。來源于黑曲霉的編碼木聚糖酶基因XYN7被克隆并在釀酒酵母INVSc1中表達。XYN7基因構(gòu)建在多拷貝穿梭載體pYES6/CT上，在GALI啟動子和CYC1轉(zhuǎn)錄終止信號的控制下成功在釀酒酵母中表達。半乳糖誘導

3、24h時重組蛋白的表達量最大，酶活可達62．5IU/mL。 釀酒酵母INVSc1中高效表達的重組酶最適溫度為55℃，可有效地結(jié)合并水解可溶性木聚糖。該木聚糖酶對硬木和谷物類木聚塘均有高水解活性。最適pH為3．5，但在很寬的pH范圍內(nèi)都有活性。酶可被CO2+完全抑制，濃度為10 mM/L Fe3+，Zn2+和Mg2+可對酶產(chǎn)生較強的抑制（殘余的活性分別為31．9％，41．2％和51．4％），Mn2+能產(chǎn)生弱的激活作用。SDS是酶的