1、第一部分Kv4.2、Kv4.3電流與大鼠海馬神經(jīng)元上瞬間外向鉀電流電生理學特性的比較;瞬間外向鉀電流(transient outward K<'+> current,I<,A>)即A型鉀通道,廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),具有快速激活和快速失活及對4-AP敏感等特征.I<,A>是動作電位的復極化早期外向電流的主要成分,該電流的大小對動作電位的形態(tài)和過程有較大影響.近來發(fā)現(xiàn),A電流廣泛分布在海馬神經(jīng)元的樹突處,參與調節(jié)突觸的輸入和動作電位的反向

2、傳播.這種作用可能與學習記憶的加工過程有關.為了進一步深入研究I<,A>的分子結構,該研究采用穩(wěn)定轉染pCDNA3.1/Kv4.2和pCDNA3.1/Kv4.3通道質粒到HEK293細胞株,原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元和全細胞膜片鉗記錄等方法,觀察比較了海馬神經(jīng)元上I<,A>電流和Kv4.2和Kv4.3鉀通道的電生理特性.第二部分奎尼丁和丙咪嗪對鉀通道亞型Kv4.2和Kv4.3電流的影響;瞬間外向鉀電流(I<,A>)是心肌細胞動作電位的復極化早期

3、外向電流的主要成分,在超射后立即打開,直接影響心肌復極過程.I<,A>電流的幅度和動力學特性的改變將影響心臟的一些正常生理功能,比如心臟的收縮功能和沖動傳導過程,以及誘發(fā)心律失常.Kv4.2,Kv4.3亞單位不僅存在于神經(jīng)纖維中,也廣泛分布于心臟,其電流是構成心臟瞬間外向鉀電流的主要組成部分.近年來,研究表明Ia類抗心律失常藥奎尼丁和三環(huán)類抗抑郁藥丙咪嗪能夠延長APD,其主要作用機理是抑制多種心肌細胞的I<,A>,從而發(fā)揮其抗心律失常作

4、用.為了全面了解奎尼丁和丙咪嗪抑制I<,A>電流的作用機制,該文采用全細胞膜片鉗技術觀察了奎尼丁和丙咪嗪對克隆的Kv4.2和Kv4.3鉀電流的作用.第三部分電壓依賴性鉀通道在一氧化氮誘導的海馬神經(jīng)元凋亡和壞死中的作用;目前認為,自由基引起的氧化損傷是導致阿爾茨海默病(AD)患者神經(jīng)元退化的主要終結者,是不同原因誘發(fā)神經(jīng)元損傷的最后共同通道.而大量研究表明,鉀通道在老年性癡呆發(fā)病過程中具有重要意義.因此,為了進一步研究電壓依賴性鉀通道在N

5、O誘導的神經(jīng)毒性中的作用,該研究采用原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元與硝普鈉(SNP)共同孵育,以及MTT法,Hochest33342熒光標記法,全細胞膜片鉗記錄,RT-PCR等方法,觀察了:(1)SNP對海馬神經(jīng)元的神經(jīng)毒性作用,(2)SNP對瞬間外向鉀電流(I<,A>)和延遲整流鉀電流(I<,K>)的影響,(3)SNP對電壓依賴性鉀通道亞型mRNA表達的影響.第四部分抗老年癡呆藥物他克林和雌激素對海馬神經(jīng)元電壓依賴性鉀電流和Kv2.1鉀電流

6、的影響;他克林(tacrine,THA)是第一個應用于治療AD藥物.近年來的一些研究報道證實他克林在治療AD過程中除主要抑制膽堿酯酶外,還存在其它作用機制.他克林作為4-AP的衍生物,還可能通過阻斷鉀通道來協(xié)同THA的膽堿酯酶的抑制作用共同參與治療AD.然而,Kraliz等研究發(fā)現(xiàn)低濃度的他克林可選擇性的抑制I<,K>,而不影響其它鉀電流.為了進一步揭示他克林的作用機制,該文采用全細胞膜片鉗技術觀察了他克林對海馬神經(jīng)元I<,K>和I<,