1、第一部分缺血再灌注大鼠心肌中TNF-α與fgl2表達的研究
　　目的:大量的實驗已經(jīng)研究了TNF-α在心肌缺血再灌注中的作用。但是TNF-α在缺血再灌注微循環(huán)障礙中的作用還不明確。我們通過檢測大鼠缺血再灌注中TNF-α和fgl2的表達量來明確在動物模型中fgl2的表達與TNF-α是否有關(guān)。
　　方法:建立大鼠缺血再灌注模型,將大鼠分為假手術(shù)組,缺血再灌注1天組,3天組,7天組。另外設(shè)立TNF-α中和性抗體干預(yù)組,并設(shè)立假手術(shù)

2、組+TNF-α中和性抗體組、缺血再灌注+非免疫性抗體組作為對照。將大鼠心臟左前降支(LAD)結(jié)扎30分鐘,給予1天,3天,7天不同再灌注。用Evans和TTC雙染法確定心肌梗死面積。用Westernblot方法檢測TNF-α和fgl2的表達量。TNF-α中和性抗體干預(yù)實驗中,缺血再灌注前3小時腹腔內(nèi)注射TNF-α中和性抗體,觀察fgl2的表達量。
　　結(jié)果:缺血再灌注3天組的大鼠梗死面積明顯大于1天組,和7天組。大鼠缺血再灌注后T

3、NF-α和fgl2表達升高,TNF-α和fgl2蛋白在缺血再灌注3天組中表達量明顯比1天組和7天組高,當TNF-α被TNF-α中和性抗體中和后,fgl2蛋白表達量下降。
　　結(jié)論:大鼠缺血再灌注后心肌組織TNF-α和fgl2的表達升高,fgl2的表達升高可能與TNF-α表達升高有關(guān)。
　　第二部分促炎因子TNF-α對大鼠微血管內(nèi)皮細胞fgl2表達影響的研究
　　目的:心肌缺血再灌注損傷病理生理機制復雜,促炎因子TNF-

4、α在心肌缺血再灌注損傷中起著關(guān)鍵作用,并且微循環(huán)障礙在心肌缺血再灌注損傷中具有重要影響,本實驗通過研究TNF-α對大鼠微血管內(nèi)皮細胞fgl2表達的影響來探索心肌缺血再灌注微循環(huán)障礙中微血栓形成的機制。
　　方法:培養(yǎng)大鼠原代心肌微血管內(nèi)皮細胞,用TNF-α不同的濃度(12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/ml)刺激細胞24小時,用25ng/mL的TNF-α刺激不同的時間(12小時,24小時,48小時),用實時定量PCR檢測

5、fgl2mRNA表達水平,用激光共聚焦和Westernblot檢測fgl2蛋白表達。用凝血酶生成實驗檢測被TNF-α刺激后大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞的促凝活性。
　　結(jié)果:TNF-α刺激后大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞后,fgl2mRNA和蛋白表達升高,相應(yīng)地,微血管內(nèi)皮細胞促凝血酶生成活性增加。激光共聚焦檢測表明fgl2表達在微血管內(nèi)皮細胞細胞膜上。
　　結(jié)論:TNF-α可以刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞表達fgl2,并促進凝血酶的生成。

6、這可能是大鼠缺血再灌注微循環(huán)障礙中原位微血栓形成的原因之一。
　　第三部分TNF-α誘導大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞fgl2表達信號通路機制的研究
　　目的:大量實驗研究表明NF-kB和p38MAPK信號傳導通路參與了缺血再灌注損傷,但是NF-kB和p38MAPK信號傳導通路在大鼠缺血再灌注微循環(huán)障礙中的作用并不完全清楚,本實驗研究探索大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞中TNF-α誘導fgl2表達信號通路機制。
　　方法:培養(yǎng)大鼠原代心

7、肌微血管內(nèi)皮細胞,用NF-kB特異性抑制劑PDTC(50μmol/l)、p38MAPK特異性抑制劑SB203580(10μmol/l)預(yù)孵育大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞1小時,然后用TNF-α(25ng/ml)刺激大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞24h。Westernblot檢測fgl2蛋白表達水平。
　　結(jié)果:預(yù)孵育PDTC(50μmol/l)1小時后,TNF-α誘導的大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞fgl2表達明顯減少。預(yù)孵育SB203580(10μm