1、背景
　　 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)是一種定植于人的胃粘膜的微需氧、螺旋狀的革蘭陰性桿菌。H.pylori感染普遍存在，已造成全球50%以上的人口感染，尤其在中國等發(fā)展中國家，感染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國家。盡管H.pylori感染率很高，但只有大約10-20%感染者出現(xiàn)臨床疾病狀態(tài)。H.pylori長期持續(xù)性感染可導(dǎo)致慢性胃炎、胃潰瘍及胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤等胃部疾病，且與胃癌的發(fā)生密切

2、相關(guān)，已被世界衛(wèi)生組織(WHO)列位1類致癌因子。
　　 胃炎等胃腸道疾病的發(fā)生除了與H.pylori感染有關(guān)外，還受到宿主遺傳、環(huán)境等因素的影響。宿主遺傳因素與胃炎等胃腸疾病發(fā)生相關(guān)性主要體現(xiàn)在與免疫反應(yīng)相關(guān)的免疫遺傳因素，尤其是主要組織相容性復(fù)合體(MHC)系統(tǒng)。MHC系統(tǒng)編碼的人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)是由一系列緊密連鎖的基因座位所組成的具有高度多態(tài)性的復(fù)合體，是目前所知最具復(fù)

3、雜的基因系統(tǒng)并且在免疫反應(yīng)中起重要的作用。HLA具有單倍體遺傳、連鎖不平衡(LD)等遺傳特征，還具有抗原遞呈和等位基因多態(tài)性的特點(diǎn)，因此HLA被認(rèn)為與疾病的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 HLA主要包括Ⅰ和Ⅱ兩類分子，分別介導(dǎo)CD8+和CD4+T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，發(fā)揮不同的免疫作用。其中Ⅱ類分子等位基因的多態(tài)性與H.pylori感染和胃部疾病發(fā)生存在一定相關(guān)性，已有文獻(xiàn)報道。但由于不同的民族、不同的地區(qū)甚至研究者運(yùn)用研究方法的不同，所得到的研

4、究結(jié)果存在差異。目前，對于HLA進(jìn)行的基因分型主要依據(jù)PCR反應(yīng)為基礎(chǔ)的分型方法，如PCR-RFLP、PCR-SSOP、PCR-SBT、PCR-SSP、PCR-SSCP。然而這些分型方法都存在著各自的局限性，費(fèi)用卻比較昂貴，其中PCR-SBT的分型方法被公認(rèn)為是最直接，最準(zhǔn)確的分型方法。
　　 因此，本課題基于PCR-SBT方法的原理，運(yùn)用自行設(shè)計的特異PCR引物首先建立了PCR-SBT基因分型方法，分析重慶地區(qū)漢族人群HLA-

5、DRB1等位基因分布特點(diǎn)與多態(tài)性，探討HLA-DRB1等位基因多態(tài)性與H.pylori感染以及感染后胃部疾病發(fā)生與類型的相關(guān)性。通過上述研究，為深入揭示H.pylori感染不同個體后多種類型疾病發(fā)生的免疫遺傳學(xué)機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 目的
　　 本研究通過建立HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法，對中國重慶地區(qū)漢族人群進(jìn)行HLA-DRB1等位基因分型，揭示HLA-DRB1基因多態(tài)性及其分布特點(diǎn)；闡明HLA-D

6、RB1等位基因與H.pylori感染及胃部疾病發(fā)生的的相關(guān)性。
　　 方法
　　 1.外周靜脈血基因組DNA的提取。
　　 運(yùn)用血液基因組提取試劑盒提取血液基因組DNA，-20℃保存，用于后續(xù)PCR。
　　 2.HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法的建立。
　　 根據(jù)IMGT/HLA數(shù)據(jù)庫中HLA-DRB1第二外顯子的基因序列，針對不同亞型第二外顯子的堿基序列差異，采用Primer5.0軟

7、件設(shè)計出八條正向引物和一條反向引物，并由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成(HPLC純度)。將擴(kuò)增的目的條帶回收進(jìn)行DNA測序。運(yùn)用Chromas和Genetool軟件分析和拼接測序結(jié)果，并在IMGT/HLA數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，以確定其亞型。
　　 3.H.pylori感染檢測。
　　 采用ELISA方法檢測血清中抗H.pylori特異性IgG抗體，以分析與判斷H.pylori感染情況
　　 4.數(shù)據(jù)分析。
　　

8、運(yùn)用PCR-SBT的方法對所采集的樣本進(jìn)行HLA-DRB1等位基因分型，組間比較采用卡方(x2)檢驗(yàn)，OR值和95%的置信區(qū)間用于患病風(fēng)險的評價。
　　 結(jié)果
　　 1.重慶地區(qū)H.pylori感染率為34.2%。
　　 2.HLA-DRB1*09:01(29.1%)等位基因頻率最高，基因頻率最低的是DRB1*12:01、DRB1*12:02、DRB1*14:05和DRB1*15:02，各占1.26%。
　

9、　 3.HLA-DRB1等位基因型頻率在男女之間無顯著性差異。
　　 4.HLA-DRB1*04:05等位基因與H.pylori感染呈負(fù)關(guān)聯(lián)(P=0.035、OR=0.265、95%CI=0.076-0.922)。
　　 5.HLA-DRB1*15:01等位基因與胃癌或胃炎發(fā)生呈負(fù)關(guān)聯(lián)(胃癌患者與正常比較，P=0.039、OR=0.287、95％CI=0.091-0.905；胃炎患者與正常比較，P=0.001、OR=0