1、背景和目的：雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)是從吸水性鏈霉菌的發(fā)酵液中提取出來的一種新型大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑。它可與磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物 RAPA靶體蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信號(hào)通路下游分子蛋白mTOR特異性結(jié)合,從而阻斷該信號(hào)通路對(duì)周圍影響因子的刺激應(yīng)答及傳導(dǎo)。RAPA近年來一直是國(guó)內(nèi)外的關(guān)注熱點(diǎn),許多研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RAPA有良好的抗腫瘤效果,包括乳腺癌、肺癌、腎癌、前列腺癌等,對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖有

2、很強(qiáng)的抑制作用。最近國(guó)外更發(fā)現(xiàn)RAPA還可用于治療阿爾茨海默病,但對(duì)皮膚上皮鱗癌細(xì)胞的作用鮮卻有報(bào)道。皮膚上皮鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌)是皮膚表皮細(xì)胞的惡性腫瘤,又稱為皮樣癌,常見于50歲以上的老年人,高發(fā)于頭皮,面部,口舌等處,尤其是皮膚與粘膜交界處。上皮鱗癌發(fā)展快,對(duì)組織破壞力強(qiáng),具有很強(qiáng)的侵襲性和遷移性。臨床治療主要采用根治性切除手術(shù),并聯(lián)合術(shù)后放療或化療。但由于鱗癌細(xì)胞的高侵襲性和高遷移性,易發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,因此臨床上的預(yù)后不良。而皮樣

3、癌的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚,但有研究表明,可能由于 Ras信號(hào)通路的激活,進(jìn)而活化PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路,促進(jìn)上皮細(xì)胞的過度增殖、遷移和脫(轉(zhuǎn))分化,同時(shí)導(dǎo)致了表皮屏障的增厚和功能障礙,甚至是表皮形成的失敗。本研究旨在觀察RAPA對(duì)于上皮鱗癌細(xì)胞的作用,觀察細(xì)胞生物學(xué)行為上的變化,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討;為后續(xù)臨床局部治療皮膚鱗癌、預(yù)防癌細(xì)胞的局部侵潤(rùn)和遷移提供理論依據(jù)。
　　方法：1.實(shí)驗(yàn)分為Control(正常對(duì)

4、照組)、RAPA處理組(5、10、20 nmol·L-1)。
　　2.通過噻唑藍(lán)(MTT)試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的RAPA(5,10,20 nmol·L-1)對(duì)A431增殖情況的影響,并選出最適濃度。
　　3.Annexin V-FITC流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè) RAPA對(duì)細(xì)胞的促凋亡作用。
　　4.劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell assay分別檢測(cè)RAPA對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的抑制作用。
　　5.Reverse transcr

5、iption PCR、Western blot檢測(cè)經(jīng)藥物處理前后細(xì)胞中OPN的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同濃度RAPA對(duì)A431增殖有抑制作用,且表現(xiàn)濃度依賴性。
　　2.RAPA作用于A431細(xì)胞48 h后,劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)顯示A431的遷移和侵襲能力明顯受到抑制,但Facs實(shí)驗(yàn)結(jié)果未顯示RAPA對(duì)細(xì)胞有促凋亡作用。
　　3.RT-PCR和Western Blot結(jié)果都顯示RAPA