1、凝血因子Ⅸ/Ⅹ結合蛋白存在于蝰科蛇毒中，它們不具有酶活性，通過與凝血因子Ⅸ/Ⅹ結合來延長凝血時間。皖南尖吻蝮蛇毒中抗凝血因子Ⅰ(ACFⅠ)、抗凝血因子Ⅱ(ACFⅡ)和抗血小板凝集素(agkisacutacin)都是凝血因子Ⅸ/Ⅹ結合蛋白家族的成員。本文對ACFⅠ、ACFⅡ和agkisacutacin的分離純化、金屬離子的半徑和離子勢對蛋白質結構和功能的影響進行了系統的研究。 1.GdnHCl誘導RE3+重組ACFⅡ的去折疊過程遵

2、循三態(tài)機制，有一個穩(wěn)定的中間態(tài)。RE3+取代ACFⅡ中Ca2+降低其天然態(tài)的穩(wěn)定性，同時顯著增強其中間態(tài)的穩(wěn)定性。首次發(fā)現ACFⅡ中間態(tài)去折疊過程中自由能變化隨金屬離子的離子勢增大呈線性增加。RE3+誘導ACFⅡ重新折疊過程中至少存在兩個折疊相，金屬離子半徑在RE3+誘導ACFⅡ重折疊快反應中起主導作用，而金屬離子的離子勢在維持ACFⅡ中間態(tài)的穩(wěn)定性時起主導作用。 2.GdnHCl誘導Mg2++ACFⅠ、Sr2+-ACFⅠ和Ba

3、2+-ACFⅠ的去折疊反應均是一個兩態(tài)過程。堿土金屬離子中只有與鈣離子半徑最接近的Sr2+可以使ACFⅠ與FⅩa發(fā)生結合反應。ACFⅠ利用其分子表面的凹隙部位與凝血因子Ⅸ/Ⅹ分子中Gla區(qū)結合，金屬離子半徑影響ACFⅠ分子表面的特定凹隙結構。 3.純化的agkisacutacin分子中含有一個Ca2+離子，其GdnHCl誘導的去折疊反應是一個兩態(tài)過程。當脫去鈣離子后，agkisacutacin去折疊過程中自由能△G0下降，當結合