1、HLA (Human Leukocyte Antigen，HLA)是具有高度多態(tài)性和連鎖不平衡的基因群。其多態(tài)性被證實與移植手術(shù)預(yù)后，強直性脊柱炎、多發(fā)性硬化等自身免疫疾病，與HIV、HCV等病毒感染性疾病以及自發(fā)性流產(chǎn)，妊高征等疾病有相關(guān)性。 HLA基因DNA水平的分型技術(shù)主要包括以下方法：PCR-RFLP，PCR-SSCP，PCR-SSO，PCR-SSP和PCR-SBT。PCR-SSO和PCR-SSP方法分別使用特異性的寡核

2、苷酸探針和特異性引物分型，有著快速、簡便、準確度高的優(yōu)點，是目前最為常用的 HLA 分型方法。PCR-SBT方法是國際組織相容性工作組推薦的HLA基因分型技術(shù)。該方法重復(fù)性和精確度高，可直接獲得詳細的序列圖譜，在確認其他方法所發(fā)現(xiàn)的新的HLA等位基因、研究HLA與疾病的相關(guān)性等方面有明顯優(yōu)勢，是目前HLA高分辨率分型的最可靠方法。 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染是嚴重危害公眾健康的全球性公共衛(wèi)生問

3、題。目前我國HBV攜帶者超過1億。HBV感染后可有多種臨床表現(xiàn)和轉(zhuǎn)歸：從隱匿性感染、無癥狀攜帶者、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化到原發(fā)性肝細胞癌等。這種臨床表現(xiàn)的多樣性不可避免地與宿主免疫反應(yīng)的強弱、類型等有關(guān)。HLA在免疫應(yīng)答的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，因此從控制和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的HLA分子入手，研究HBV感染后個體間不同臨床轉(zhuǎn)歸的遺傳易感性有重要意義。國內(nèi)外就HLA多態(tài)性與HBV感染轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性也進行了大量的研究，但結(jié)論差異較大，

4、即使是同一地區(qū)的研究結(jié)果也存在重復(fù)性較差的問題。 本研究以國際組織相容性工作組 (IHWG)推薦的 HLA-SBT 標準分型方法為依據(jù)，配合使用Lasergene Seqman軟件和NCBI dbMHC數(shù)據(jù)庫的SBT Input在線序列分析工具，建立了適合本實驗室開展的HLA基因分型方法，并應(yīng)用此方法對377例樣本進行了HLA-A、-B和-C基因座位的分型。本次研究共成功分型HLA-A基因座位樣本366份，HLA-B基因座位樣本

5、375份，HLA-C基因座位樣本365份。由于PCR-SSP方法快捷、簡便，本研究中設(shè)計特異性的引物對HLA-Bw4、HLA-Bw6、HLA-C1、HLA-C2和HLA-A*110101/1121N進行快速分型。在92例標本中比較了PCR-SSP分型方法與PCR-SBT方法。HLA-Bw4、Bw6的正確率分別為92.6％和94.5％，HLA-C1、C2的正確率分別為96.6％和97.0％，HLA-A*110101/1121N的正確率為1

6、00％。另外，本研究中使用PCR-SBT分型法，發(fā)現(xiàn)了2個新的HLA等位基因：HLA-Cw*12030102和HLA-A*9216，序列分別被遞交到EMBL核酸序列數(shù)據(jù)庫和GeneBank核酸數(shù)據(jù)庫，獲取號碼(accession number)分別為AM412763和EF468681。這兩個新等位基因已獲得世界衛(wèi)生組織命名法委員會(WHO Nomenclature Committee)的正式命名。 以江蘇地區(qū) HBV 感染后不同

7、轉(zhuǎn)歸個體343例為研究樣本，其中肝癌組103例，肝硬化組66例，慢性乙肝組132例，HBV清除組42例。采用PCR-SBT的方法，在HLA高分辨率分型水平下研究了HLA-A、-B、-C基因座位等位基因多態(tài)性與肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組和HBV清除組的相關(guān)性。經(jīng)統(tǒng)計分析，A*330301，B*5801/5811和Cw*030201/030202與HBV感染后清除相關(guān)，p 值分別為0.0142，0.0606和0.0344；A*110101

8、/1121N和B*130201與HBV感染后清除呈負相關(guān)，p值分別為0.0013和0.0424。B*40G1與感染后慢性化相關(guān)，p值為0.0484。A*330301，Cw*030201/030202和Cw*120201/120202與肝癌的發(fā)生相關(guān)，p值為0.0513，0.0247和0.0349；B*150101G1 與肝癌發(fā)生呈負相關(guān)，p值為0.0133。 另外，使用軟件PyPop計算了HLA-A-B-C、HLA-A-B、HL

9、A-A-C和HLA-B-C單位型在各組的頻率。分析結(jié)果顯示，單倍型A*3303:B*5801:Cw*0302，A*3303：B*5801，A*3303：Cw*0302，A*0201：Cw*0304和B*5801：Cw*0302與HBV感染后清除相關(guān)，P值分別為0.0690，0.0690，0.0371，0.0227和0.0630；單倍型A*1101:Cw*0702與HBV感染后清除呈負相關(guān)，P值為0.0294。單倍型B*4001:Cw*0