1、病毒在感染宿主細胞后可以激活細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導來支持自身的高效復制。甲型流感病毒感染可以激活宿主細胞的PI3K/Akt通路。但是PI3K/Akt通路在流感病毒感染過程中支持流感病毒有效復制下游具體機制并不清楚。為了進一步揭示PI3K通路對流感病毒增殖進行調(diào)控的具體分子機制，本研究立足于PI3K通路下游兩個主要的生物學效應(細胞凋亡和翻譯起始的調(diào)節(jié))，探討了PI3K/Akt信號通路的三個關鍵的下游分子mdm2、GSK-3β和mTOR對流感病

2、毒感染過程的影響。在研究mdm2、GSK-3β和mTOR對流感病毒誘導的細胞凋亡的調(diào)控作用中，本研究主要通過RNA干擾技術使mdm2、GSK-3β或mTOR基因表達下調(diào)后，應用Caspase Glo3/7凋亡檢測試劑盒和流式細胞術檢測了流感感染細胞凋亡水平的變化，應用CCK-8試劑盒檢測了細胞活力的改變，并檢測了對細胞上清的流感病毒滴度的影響。
　　在mTOR介導的翻譯調(diào)控對流感病毒感染過程影響的研究中，本研究采用蛋白免疫印記方法

3、檢測了mTOR下游兩個關鍵翻譯調(diào)控分子4E-BP1和p70S6K在流感感染細胞，PI3K抑制劑LY294002或mTOR抑制劑rapamycin處理的流感病毒感染細胞磷酸化水平的變化。通過NP蛋白間接免疫熒光實驗及細胞液中的病毒滴度等實驗檢測了相應的病毒增殖水平。本研究還使用真核表達載體在細胞內(nèi)表達甲型流感病毒的NS1蛋白，并檢測了NS1蛋白表達對Akt及4E-BP1磷酸化的影響。在對流感病毒誘導的細胞凋亡的研究中，本研究發(fā)現(xiàn)：mdm2

4、分子在流感病毒感染過程中發(fā)生了有趣的亞細胞定位變化；mdm2基因表達下調(diào)增強了流感病毒感染的A549細胞的細胞活力并降低了流感病毒感染造成的A549細胞凋亡，同時提高了細胞上清中的病毒滴度；GSK-3β基因表達下調(diào)降低了流感病毒感染的A549細胞的細胞活力并且增強了流感病毒感染造成的細胞凋亡，同時降低了細胞上清中的病毒滴度；mTOR基因表達下調(diào)降低了流感病毒感染的A549細胞的細胞活力并且增強了流感病毒感染造成的細胞凋亡，同時降低了細胞

5、上清中的病毒滴度。在對于流感病毒蛋白翻譯控制的研究中，本研究發(fā)現(xiàn)：甲型流感病毒感染激活了PI3K/Akt通路并可以引起4E-BP1的磷酸化；使用LY294002阻斷PI3K/Akt信號通路可以同時阻斷p70S6Kianse和4E-BP1的磷酸化；使用Rapamycin阻斷mToRC1的功能可以阻斷p70S6K的磷酸化而對4E-BP1的磷酸化并沒有顯著影響，特別是在感染后期；LY294002影響了流感病毒NP蛋白的表達和出核并降低了流感病

6、毒的滴度，而Rapamycin對流感病毒NP蛋白的表達和出核過程沒有明顯影響但是卻降低了流感病毒的滴度；使用質(zhì)粒表達流感病毒的NS1蛋白可以激活PI3K/Akt通路并磷酸化4E-BP1。以上研究結果提示甲型流感病毒的NS1蛋白可以通過PI3K/Akt信號通路磷酸化4E-BP1并可能因此影響了病毒蛋白的翻譯。
　　本研究揭示了mdm2、GSK-3p和mTOR對甲型流感病毒誘導的細胞凋亡的調(diào)控作用以及對病毒增殖的影響。同時研究了mTO