1、目的 篩選針對(duì)病毒性心肌炎(VMC)細(xì)胞模型有效的天然藥物成分黃芪三萜類物質(zhì)(Total Extract of Astragalus，TEA)，觀察研究其在VMC外細(xì)胞培養(yǎng)模型中的心肌細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制，以及對(duì)細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的影響。 方法 建立病毒性心肌炎細(xì)胞模型，觀察TEA對(duì)柯薩奇病毒B組3型(CVB3)病毒感染后的Veto細(xì)胞是否有保護(hù)作用；采用差速貼壁法培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞，鏡下觀察心肌細(xì)胞搏動(dòng)次數(shù)，使用

2、HE染色和a-actin免疫組化法鑒定培養(yǎng)心肌細(xì)胞的純度。以CVB3病毒感染心肌細(xì)胞后，進(jìn)行細(xì)胞病變(CPE)抑制試驗(yàn)：CVB3病毒感染乳鼠原代心肌細(xì)胞后，于不同時(shí)間加入TEA和病毒，逐日觀察心肌細(xì)胞搏動(dòng)次數(shù)、細(xì)胞病變，MTT染色以比較各組間活細(xì)胞數(shù)的差別；病毒繁殖抑制實(shí)驗(yàn)比較不同分組間TCID50的差別以驗(yàn)證TEA的抗病毒活性。實(shí)驗(yàn)以鹽酸胍作為陽(yáng)性對(duì)照藥。應(yīng)用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)、DNA Ladder分析凋亡發(fā)生的情況，RT-PCR測(cè)定C-

3、myc表達(dá)變化。 結(jié)果 TEA在體外實(shí)驗(yàn)中(CPE抑制實(shí)驗(yàn))能有效抑制CVB3引起的在Vero細(xì)胞及心肌細(xì)胞病變(P<0.01)。病毒繁殖抑制實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為：加藥組比病毒對(duì)照組TCID50降低兩個(gè)以上對(duì)數(shù)值，其藥效優(yōu)于同等濃度的抗病毒陽(yáng)性對(duì)照藥物——鹽酸胍。流式細(xì)胞儀和姬姆薩染色能夠觀察到CVB3感染心肌細(xì)胞后存在凋亡，并顯示加藥組凋亡細(xì)胞比率要小于病毒對(duì)照組，但沒有觀察到明顯的DNA Ladder。RT-PCR結(jié)果提示T