1、目的：
　　 建立大鼠肝缺血再灌注損傷模型,按時點采集標(biāo)本,對血清尿素氮(BUN),血清肌酐(Cr),腎組織脂質(zhì)過氧化物的終產(chǎn)物-丙二醛(MDA)及血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)進行測定；對腎組織進行MMP-2,MMP-9蛋白測定,探討氯化釓抑制枯否細胞對大鼠肝缺血再灌注所致腎損傷的保護作用及其機制。
　　 材料與方法
　　 1、材料
　　 選擇周齡為7～8周雄性Wistar大鼠100只,體重為180～

2、220g,按體重隨機分為實驗組(氯化釓+肝缺血再灌注)和對照組(生理鹽水+肝缺血再灌注)。氯化釓購自日本和光純藥工業(yè)株式會社；血生化相關(guān)試劑購自德國寶靈曼公司；TNF-α試劑盒(美國BD公司)；丙二醛(MDA)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)；兔抗大鼠MMP-9抗體(美國Santa Cruz公司)；兔抗大鼠MMP-2抗體(美國Santa Cruz公司)。HITACHI-7600A全自動生化分析儀；芬蘭Multlskan MK-3型全

3、自動多功能型酶標(biāo)儀；圖片分析采用MetaMorph/Evolution MP5.0/BX51顯微圖象分析系統(tǒng)。
　　 2、方法
　　 實驗組術(shù)前24h、48h 經(jīng)鼠尾靜脈注射氯化釓(10mg/kg),對照組給予等量生理鹽水。參照Kobayashi法建立左半肝缺血再灌注模型(阻斷左肝動脈、門靜脈及肝管),缺血均為60分鐘,按再灌注后0.5h、1h、6h、12h、24h時點采集標(biāo)本,每組每個時點10只大鼠。麻醉藥選擇10％水

4、合氯醛,按3ml/kg計量腹腔注射給藥。免疫組化標(biāo)本固定均采用4％多聚甲醛0.1mol/L磷酸緩沖液(pH=7.3)。經(jīng)膈肌心臟穿刺取血后,離心5min,留取上清液,血清由超低溫冰箱保存,集中測定。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中TNF-α伍的水平。取大鼠左腎,其中左腎中1/3腎組織均漿后TBA法測定MDA；取左腎下1/3腎組織2×1×0.3cm行免疫組化染色。免疫組化結(jié)果在400倍光鏡下觀察,胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性細胞。每張切片取5個不重

5、疊的高倍視野,測量IOD值,求出其均值,代表本張切片的平均IOD值。IOD為累計積分光密度。所有計量指標(biāo)均用mean士SD表示。所有數(shù)據(jù)均用專業(yè)軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計,采用t檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1、血清BUN
　　 再灌注后1h開始,實驗組血清BUN低于對照組,且6、12及24h時點實驗組與對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。
　　 2、血清Cr
　　 再灌注后,各時點實驗組血清

6、Cr均低于對照組,實驗組在再灌注后6、12及24h時點與對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。
　　 3、血清TNF-α
　　 再灌注后,實驗組各時點的血清TNF-α均低于對照組,有顯著差異(P<0.05)。且兩組走勢基本相同,12h達到高峰,之后有下降趨勢。
　　 4、腎組織勻漿MDA
　　 再灌注后6h、12h、24h時點實驗組MDA明顯低于對照組(P<0.05)。
　　 5、腎組織MMP-

7、2染色
　　 再灌注后,兩組染色的IOD值均隨時間延長呈上升趨勢,12h后上升趨勢變緩。實驗組再灌注后各時點IOD值均低于對照組,且6、12及24h時點實驗組和對照組之間存在顯著性差異(P<0.05)。陽性表達部位主要在皮質(zhì)深層近曲小管上皮細胞、腎小管周圍的血管內(nèi)皮細胞及間質(zhì)細胞。
　　 6、腎組織MMP-9染色
　　 再灌注后,兩組IOD值隨時間呈遞增走勢,實驗組較對照組增長速度緩慢,各時點IOD值均低于對照組

8、,且6、12及24h時點實驗組和對照組之間存在顯著性差異(P<0.05)。陽性表達部位與MMP-2陽性表達部位相近,主要在皮質(zhì)深層近曲小管上皮細胞、腎小管周圍的血管內(nèi)皮細胞及間質(zhì)細胞。
　　 結(jié)論：
　　 本研究通過建立大鼠肝缺血再灌注損傷模型,按再灌注后不同時點分別采集標(biāo)本,測定血清BUN、血清Cr、血清TNF-α、腎組織MDA以及對腎組織行MMP-2、MMP-9免疫組化染色,探討氯化釓抑制枯否細胞對大鼠肝缺血再灌注所