1、酪氨酸蛋白激酶受體(receptor tyrosine kinases,RTKs)在細(xì)胞生長(zhǎng)和分化過(guò)程中起著重要作用,參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)、惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等許多過(guò)程。作為PTK最大亞族Eph(erythropoietin producing hepatoma cell line)受體激酶家族中的一個(gè)成員,EphA2在成熟上皮細(xì)胞中表達(dá)水平很低,通過(guò)與細(xì)胞表面配體Ephrin(EFN)A1-5的結(jié)合導(dǎo)致EphA2受體發(fā)生磷酸化

2、,并且通過(guò)其下游信號(hào)調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長(zhǎng)、發(fā)育等,同時(shí)也能促進(jìn)EphA2受體自身的降解。而在腫瘤細(xì)胞中,EphA2卻通常處于失磷酸化狀態(tài)且高表達(dá)。研究表明,EphA2在調(diào)節(jié)人類上皮來(lái)源的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、生存、遷移及腫瘤血管形成中有潛在的作用。同時(shí)EphA2廣泛高表達(dá)于人類許多惡性腫瘤,在乳腺癌、黑色素細(xì)胞瘤、食管癌、非小細(xì)胞癌、大腸癌、前列腺癌及卵巢癌等多種實(shí)體腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá),其表達(dá)水平與腫瘤的進(jìn)展及細(xì)胞惡性程度有關(guān)。細(xì)胞周期素D1(C

3、yclinD1)作為細(xì)胞周期G1期到S期的調(diào)節(jié)蛋白,可競(jìng)爭(zhēng)地與細(xì)胞周期素依賴激酶(CyclinDependent Kinasec,CDK)結(jié)合,并在CDK4的作用下,使Rb蛋白磷酸化。低磷酸化的Rb結(jié)合并抑制轉(zhuǎn)錄因子,后者激活某些基因,促使細(xì)胞進(jìn)入S期。低磷酸化的Rb還可刺激CyclinD1的轉(zhuǎn)錄、合成和活化而導(dǎo)致Rb磷酸化,從而在G1晚期形成一反饋環(huán)調(diào)節(jié)CyclinD1的表達(dá)。其過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控異常,進(jìn)而發(fā)生腫瘤。研究證實(shí),C

4、yclinD1在正常組織中表達(dá)量很少甚至不表達(dá),而在前列腺癌、乳腺癌及頭頸部鱗癌等許多惡性腫瘤中存在過(guò)度表達(dá),在預(yù)示腫瘤進(jìn)展和指導(dǎo)患者預(yù)后方面具有重要的臨床意義。骨肉瘤是兒童和青少年最常見(jiàn)的骨組織惡性腫瘤之一,其惡性程度高。資料顯示,局部浸潤(rùn)和肺轉(zhuǎn)移而死亡的患者占骨肉瘤死亡總數(shù)的90％以上。因此,有效地預(yù)測(cè)和治療骨肉瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是延長(zhǎng)患者生命的關(guān)鍵。聯(lián)合檢測(cè)EphA2和CyclinD1在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其對(duì)臨床意義研究,目前國(guó)內(nèi)相

5、關(guān)研究報(bào)道較少。本研究采用免疫組化SP法分別檢測(cè)了EphA2和CyclinD1蛋白在50例骨肉瘤、20例骨軟骨瘤及20例正常骨組織中的表達(dá),分析二者聯(lián)合表達(dá)與骨肉瘤發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性,尋找對(duì)骨肉瘤早期檢測(cè)和控制其侵襲轉(zhuǎn)移的新分子靶點(diǎn)。
　　方法：1.應(yīng)用免疫組化SP法分別對(duì)50例骨肉瘤組織、20例骨軟骨瘤組織及20例正常骨組織中EphA2和CyclinD1蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS

6、11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。陽(yáng)性率之間的比較采用χ2檢驗(yàn)(chi-square);兩變量之間的關(guān)系分析采用相關(guān)分析。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：1.正常骨組織EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0.00％(0/20),骨軟骨瘤組織EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0.00％(0/20),骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為78.00％(39/50);骨肉瘤組織EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與相應(yīng)的骨軟骨瘤組織及正常骨組織兩兩相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P<0.05)。
　　2.正常骨組織CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0.00％(0/20),骨軟骨瘤組織CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0.00％(0/20),骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為70.00％(35/50);骨肉瘤組織CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與相應(yīng)的骨軟骨瘤組織及正常骨膜組織兩兩相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.男性、女性骨肉瘤組織EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為80.00％(24/

8、30)和75.00％(15/20),兩者相比無(wú)顯著性;骨母細(xì)胞型、纖維母細(xì)胞型、軟骨母細(xì)胞型及其它型骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.00％(15/20)、86.67％(13/15)、70.00％(7/10)和80.00％(4/5),四種病理類型之間相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.男性、女性骨肉瘤組織CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為73.33％(22/30)和65.00％(13/20),兩者相比無(wú)顯著性差異;骨母細(xì)

9、胞型、纖維母細(xì)胞型、軟骨母細(xì)胞型及其它型骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.00％(13/20)、80.00％(12/15)、70.00％(7/10)和60.00％(3/5),四種病理類型之間相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為40.00％(4/10)、72.22％(13/18)和100.00％(22/22),Ⅲ期骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于前兩

10、者,不同臨床分期之間兩兩相比有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為20.00％(2/10)、66.67％(12/18)和95.45％(21/22),Ⅲ期骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于前兩者,不同臨床分期之間兩兩相比有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7.伴有肺轉(zhuǎn)移骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為100.00％(20/20),無(wú)肺轉(zhuǎn)移骨肉瘤

11、組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為60.00％(18/30),兩組間骨肉瘤組織EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差相比有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　8.伴有肺轉(zhuǎn)移骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為100.00％(20/20),無(wú)肺轉(zhuǎn)移骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為50.00％(15/30),兩組間骨肉瘤組織CyclinD1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差相比有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　9

12、.EphA2和CyclinD1蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,兩者之間呈正相關(guān)(P<0.01)。
　　結(jié)論：1.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率不同,隨著分化程度降低,骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高,Ⅲ期骨肉瘤組織中EphA2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期的相應(yīng)組織,提示EphA2蛋白表達(dá)可能與骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。
　　2.Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期骨肉瘤組織中CyclinD1蛋白陽(yáng)性