1、 目的：研究槲皮素抗動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)作用及其機制,為防治動脈粥樣硬化提供實驗和理論依據。方法：1.建立動脈粥樣硬化模型：(1)將46只6-8周齡的ApoE-/-小鼠正常喂養(yǎng)一周后隨機分為五組：正常組(3只)、對照組(13只)和實驗組(低、中、高槲皮素劑量組,每組各10只)。(2)對照組和實驗組喂養(yǎng)高脂飲食,12周后取正常組和對照組各3只小鼠通過HE染色、透射電鏡及眼眶取血檢測血漿中膽固醇方法檢驗動脈

2、粥樣硬化形成情況。2.實驗組分別給予低劑量槲皮素50mg/(kg·d)、中劑量槲皮素100mg/(kg·d) 、高劑量槲皮素150mg/(kg·d)喂養(yǎng),給藥后第8 w、第16w取對照組和實驗組小鼠各5只,并通過HE染色和透射電鏡、眼眶取血膽固醇方法檢測動脈粥樣硬化改善情況。3.采用免疫組織化學技術、逆轉錄PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)和ELISA法檢測HMGB1、TLR4在槲皮素抗動脈粥樣

3、硬化中蛋白和基因的表達。結果：1.高脂飲食12周后HE染色顯示主動脈壁厚薄不均勻,內膜增厚, 斑塊于內膜表面突起,其中有脂質和壞死崩解物質混合而成,并見膽固醇結晶、鈣化；透射電鏡下顯示主動脈內皮細胞水腫明顯,局部可見細胞膜破損,可見核周隙結構擴張,內彈性膜厚度、密度不均勻；檢測血漿中膽固醇明顯增高(p﹤0.05)。動脈粥樣硬化模型建立成功。2.低劑量組 HE 染色顯示主動脈壁厚薄較均勻,內膜增厚減輕, 見斑塊輕微向內膜表面突起,少許膽固

4、醇結晶、鈣化；透射電鏡下顯示實驗組主動脈內皮細胞無水腫,核膜核周隙結構清晰；內彈性膜厚度及電子密度均勻,內皮表面有異物存積；檢測血漿中膽固醇下降不明顯(p >0.05)。3. 免疫組織化學分析顯示：在對照組中HMGB1和TLR4表達呈強陽性；隨著藥物劑量的增高,蛋白的表達出現一定程度的下調(p﹤0.05),呈劑量依賴性。在8w時,HMGB1蛋白在低、中劑量兩兩比較差異變化不明顯(p>0.05),在低劑量和高劑量、中劑量與高劑量兩組間的兩

5、兩比較有差異(p <0.05),而TLR-4蛋白在低、中、高三個劑量組間的兩兩比較均有差異(p <0.05)。在16w 時,HMGB1和 TLR-4蛋白表達均有差異,其表達水平均呈不同程度下調(p <0.05)。低劑量、中劑量和高劑量在不同時間HMGB1、TLR4蛋白表達有差異(p <0.05),呈時間依賴性。4.RT-PCR檢測顯示與相同時間點的對照組相比,HMGB1和T LR4基因的灰度值均隨著藥物濃度增加出現不同程度的下降,以高劑

6、量組表現最為明顯(p﹤0.05),呈劑量依賴性。在8w時,HMGB1基因在低、中、高三個劑量組間的兩兩比較差異變化不明顯(p>0.05),而16w 時,三個劑量組間的兩兩比較均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；而 TLR4基因在8w時,除低劑量組與對照組的差異表達變化不明顯外,其余各組的兩兩比較均有統(tǒng)計學意義(p<0.05),16w 時變化更為明顯,呈梯度式下調。低劑量、中劑量和高劑量在不同時間HMGB1、TLR4基因表達有差異(p<0.0

7、5),呈時間依賴性。5. ELISA 檢測結果顯示在對照組中 HMGB1和 TLR4蛋白表達呈強陽性；隨著藥物劑量的增高,蛋白的表達出現一定程度的下調(P﹤0.05),呈劑量依賴性。在8w時,HMGB1、TLR4蛋白在低、中劑量組間的兩兩比較差異變化不明顯(P>0.05),而在低劑量和高劑量、中劑量與高劑量兩組間的兩兩比較有差異(P<0.05)；在16w時,HMGB1和 TLR4蛋白表達均有差異,其表達水平均呈不同程度下調(P<0.05