1、背景:1887年意大利生理學(xué)家RuggeroOddi首次描述了十二指腸降部膽胰管開口處存在括約肌，此后被命名為Oddi括約肌(SphincterofOddi，SO)[1]。Oddi括約肌(SphincterofOddi，SO)獨立于十二指腸壁，末端開口于十二指腸大乳頭的括約肌，是膽汁排出膽道的唯一門戶，調(diào)節(jié)膽胰液的分泌，維持膽管內(nèi)低壓、低流量系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[2，3]。Oddi括約肌功能障礙(SphincterofOddidysfunc

2、tion，SOD)是指由SO解剖狹窄或括約肌蠕動障礙導(dǎo)致的一系列臨床病理表現(xiàn)的疾病。根據(jù)SOD分型羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)，將SOD分為胰管SO功能障礙和膽管SO功能障礙。胰管型SOD又可以分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。本實驗旨在研究胰管型SOD芍藥甘草湯治療后的療效觀察。
　　芍藥甘草湯源自張仲景的《傷寒論·辨太陽病脈證并治》[4]。由白芍藥、炙甘草等組成，因白芍藥中有效成分為芍藥甙，而芍藥甙具有較好的解痙作用，在炙甘草中，有效成分主要為甘草酸，甘草酸具

3、有抗炎作用[5]。芍藥甘草湯是較為常用的緩急止痛方劑，經(jīng)實驗研究證實，有鎮(zhèn)靜、止痛及松弛平滑肌等作用，目前在臨床上，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于呼吸、消化系統(tǒng)的病癥。芍藥甘草湯緩急止痛作用與其能夠解除平滑肌痙攣狀態(tài)相關(guān)。
　　已證實高膽固醇血癥可使兔SO發(fā)生動力異常改變，導(dǎo)致SO運動功能紊亂，舒縮功能受損。L型鈣通道是決定平滑肌舒縮功能的電壓門控性鈣離子通道，其中α1亞基是其功能亞基。鈣離子通過L-型鈣通道的內(nèi)流觸發(fā)肌肉收縮機制已被公認(rèn)。文獻(xiàn)表

4、明中藥芍藥的有效成分芍藥甙(Paeoniflorin，PF)可以舒張胃腸道平滑肌[6]，也有文獻(xiàn)證實PF對家兔離體SO肌環(huán)同樣有舒張作用[7]。但芍藥甙舒張SO具體機制尚未見相關(guān)報道。為進(jìn)一步探究芍藥甙舒張SO作用的相關(guān)機制，本研究實驗部分?jǐn)M采用Real-timePCR和WesternBlotting方法觀察不同濃度芍藥甙治療后的高膽固醇血癥兔SO細(xì)胞L型鈣通道α1C亞單位mRNA和蛋白表達(dá)的變化，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察不同濃度的芍藥

5、甙對高膽固醇血癥兔L型鈣離子通道電流(ICa·L)的影響。
　　目的:
　　第一部分:
　　應(yīng)用芍藥甘草湯治療臨床常見的胰型SOD患者并觀察其療效。
　　第二部分
　　1.觀察高膽固醇血癥對兔SO細(xì)胞L型鈣通道α1C亞單位mRNA和蛋白表達(dá)的影響;
　　2.探討不濃度的芍藥甙對高膽固醇血癥兔L型鈣通道α1c亞單位mRNA和蛋白表達(dá)的影響;
　　3.研究不同濃度的芍藥甙對正常和高膽固醇血癥兔L型鈣

6、離子通道電流的影響;
　　4.探討芍藥甙舒張SO的作用機制，為臨床治療SOD提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分:
　　1.采集大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診及住院患者標(biāo)本，患者于門診就診或入院時間為2009年1月-2010年12月，采集膽囊切除術(shù)后患者，符合羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)并符合胰型SOD診斷的患者進(jìn)行入組，入組病例共39例（其中包括Ⅰ型2例，Ⅱ型13例，Ⅲ型24例），選中入組后將患者隨機分成2組:
　　

7、1.1.治療組:23例，男性10例，女性13例，年齡35～58歲，平均年齡59.3±18.8歲;初次發(fā)病時間為術(shù)后16～57個月，平均20.3±2.4個月（其中胰型Ⅰ型1例，Ⅱ型8例，Ⅲ型例14例）;
　　1.2.對照組:16例，男性5例，女性11例，年齡35～58歲，平均52.7±20.1歲;初次發(fā)病時間為術(shù)后16～57個月，平均19.4±2.9個月（其中胰管Ⅰ型1例，Ⅱ型5例，Ⅲ型10例）。
　　2.兩組患者門診接診或入

8、院后行糾正電解質(zhì)紊亂、抗感染等治療，在治療過程中均未給予解痙藥物。對照組口服安慰劑（涼茶），治療組口服芍藥甘草湯。
　　3.觀察中藥芍藥甘草湯的治療效果，并在12個月的時間內(nèi)對患者進(jìn)行隨訪，以疼痛減輕、肝功能胰腺淀粉酶，脂肪酶恢復(fù)為觀察指標(biāo)，對其療效做出評價。
　　第二部分:
　　1.健康純種新西蘭大白兔隨機分為2組，即對照組(Concrol，CON)、高膽固醇血癥組(Hypercholesterolemia，HC)。

9、對照組飼以標(biāo)準(zhǔn)兔飼料，高膽固醇血癥組以標(biāo)準(zhǔn)飼料+膽固醇，飼養(yǎng)8周，誘發(fā)高膽固醇血癥。
　　2.提取CON組和HC組SO細(xì)胞，行原代培養(yǎng)，免疫組織化學(xué)法鑒定，并將HC組SO細(xì)胞分為三組，分別用含PF10-7mol/L，10-6mol/l,10-5mol/L的培養(yǎng)基孵育12H，CON組用正常培養(yǎng)基孵育12H。對CON組、0.1μmol/L的PF處理組、1μmol/L的PF處理組、10μmol/L的PF處理組別進(jìn)行Real-timePC

10、R和WesternBlotting實驗，分析各組L型鈣通道α1C亞單位mRNA和蛋白表達(dá)量的變化。用目的條帶和GAPDH條帶灰度值的比值表示目的mRNA的相對表達(dá)量;用目的通道條帶灰度值與GAPDH條帶光密度值的比值表示目的蛋白的相對表達(dá)量。
　　3.采用全細(xì)胞膜片鉗(wholecellpatchclamp)技術(shù)，記錄不同濃度的芍藥甙對正常和高膽固醇血癥兔ICa·L的作用。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　治療組

11、中有效16例（Ⅰ型0例，Ⅱ型有效3例，Ⅲ型有效13例），總有效率(69.6％)，1年后復(fù)發(fā)4例（Ⅱ型1例，Ⅲ型3例）復(fù)發(fā)率25％;對照組中有效2例（Ⅰ型0例，Ⅱ型1例，Ⅲ型1例），有效率12.5％，1年后復(fù)發(fā)2例（Ⅱ型1例，Ⅲ型1例）復(fù)發(fā)率100％。
　　第二部分:
　　1.高膽固醇血癥可升高L型鈣通道α1C亞單位mRNA和蛋白表達(dá)水平;
　　2.PF可以明顯降低高膽固醇血癥兔L型鈣通道α1C亞單位mRNA和蛋白表達(dá)水

12、平，而且與芍藥甙濃度有一定的依賴性;
　　3.全細(xì)胞膜片鉗證實0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L的PF能顯著抑制ICa，L電流峰值，并且具有濃度依賴性，可使(I)-(V)曲線上移。
　　結(jié)論:
　　第一部分:
　　口服芍藥甘草湯對膽囊切除術(shù)后胰型Ⅱ、Ⅲ型SOD治療效果顯著，芍藥甘草湯治療具有療程短、見效快、能夠改善肝功能、治療后復(fù)發(fā)率低等優(yōu)點，對胰型Ⅰ型SOD無明顯療效。
　　第二部分:<