1、目的: L型鈣通道是電壓門控離子通道,在動(dòng)作電位的平臺(tái)期參與心肌細(xì)胞外鈣內(nèi)流,并在心肌收縮偶聯(lián)過(guò)程中起重要作用.心鈉素是心臟分泌的一種多肽,其可下調(diào)L型鈣電流,但作用機(jī)制還不清楚.本文旨在探索心鈉素對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞L型鈣電流的調(diào)控機(jī)制. 方法:應(yīng)用胚胎干細(xì)胞懸滴培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞,利用膠原酶Ⅱ消化法獲得不同時(shí)期的單個(gè)跳動(dòng)的心肌細(xì)胞:利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),記錄心鈉素刺激下心肌細(xì)胞的L型鈣電流及相關(guān)信號(hào)通道的

2、抑制劑或激活劑對(duì)L型鈣電流的調(diào)控.免疫熒光法測(cè)細(xì)胞中特異蛋白ANP和肌球蛋白MHC表達(dá);檢測(cè)不同時(shí)期小鼠胚胎心臟中ANP表達(dá)水平. 結(jié)果:利用懸滴法培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞并分化為跳動(dòng)的EB,酶消化得到了單個(gè)跳動(dòng)的心肌細(xì)胞,免疫熒光檢測(cè)到心肌特異的a-MHC表達(dá),并且在早期ESMC中檢測(cè)到心肌細(xì)胞動(dòng)作電位和鈣電流. ANP在EDS和LDS心肌細(xì)胞中對(duì)動(dòng)作電位有顯著負(fù)變時(shí)效應(yīng),并且能夠降低EDS和LDS心肌細(xì)胞的基礎(chǔ)的和Iso激活的

3、L型鈣電流.ANP降低I<,Lcal>途徑,獨(dú)立于NO途徑、PTX敏感的G蛋白(Go,Gi)和可溶性GC.ANP對(duì)I<,Lcal>的抑制是通過(guò)其受體激活了顆粒性GC、cGMP依賴的PDEⅡ途徑,PDEⅡ水解cAMP導(dǎo)致其濃度降低,減少了其調(diào)控的鈣通道開放頻率. RT-PCR結(jié)果顯示在胚胎發(fā)育過(guò)程中ANP的表達(dá)持續(xù)升高,并且在8天胚胎中已經(jīng)表達(dá),第12天ANP強(qiáng)烈表達(dá),隨后ANP表達(dá)基本沒(méi)變化,但是出生后分泌增多,成體后表達(dá)量降低.