1、本研究旨在通過優(yōu)化ES細(xì)胞培養(yǎng)條件,首先模擬肝臟體內(nèi)分化發(fā)育,分階段、定向誘導(dǎo)E14小鼠ES細(xì)胞分化為肝細(xì)胞,從形態(tài)學(xué)、特異性基因表達(dá)和功能測(cè)定三個(gè)水平對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行分析、鑒定.在此基礎(chǔ)上,對(duì)誘導(dǎo)肝細(xì)胞進(jìn)行凝血因子Ⅷ、Ⅸ表達(dá)格局分析.這無論在研究構(gòu)思上還是在ES細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化研究方面均屬新的嘗試,本研究將為血友病的細(xì)胞替代治療研究提供新的思路和供體細(xì)胞來源.同時(shí),我們擬進(jìn)行小鼠ES細(xì)胞誘導(dǎo)為心肌細(xì)胞的研究,目前有關(guān)小鼠ES細(xì)胞分化為心

2、肌細(xì)胞的研究報(bào)道,基本是在未添加任何因子條件下,進(jìn)行體外分化培養(yǎng),誘導(dǎo)小鼠ES細(xì)胞形成具有自發(fā)性節(jié)律收縮的心肌細(xì)胞.但是有學(xué)者發(fā)現(xiàn),雖然在未添加生長(zhǎng)因子情況下進(jìn)行分化培養(yǎng),ES細(xì)胞可以自發(fā)分化為多種類型細(xì)胞,包括自發(fā)節(jié)律收縮的心肌細(xì)胞;而若有生長(zhǎng)因子存在,則可以產(chǎn)生數(shù)量更多的、高度分化且類型均一的特定細(xì)胞.因此,本研究嘗試將酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子

3、(hepatocyte growth factor,HGF)作為刺激因子,體外分階段、定向誘導(dǎo)E14小鼠ES細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,希望獲得更多的、分化均一的心肌細(xì)胞.本研究無論對(duì)于ES細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究,還是獲得豐富的供體細(xì)胞來源用于細(xì)胞替代治療,都具有十分重要的研究和應(yīng)用意義.本研究方案包括:一、小鼠ES細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定與優(yōu)化二、體外定向誘導(dǎo)E14小鼠ES細(xì)胞為肝臟細(xì)胞及其凝血因子格局分析三、體外定向誘導(dǎo)E14小鼠ES細(xì)胞為具有節(jié)律性收縮