1、白血病是威脅人類健康的主要惡性疾病之一，目前治療措施仍以化療為主。通過大量研究發(fā)現(xiàn)影響化療效果和白血病患者長期無病生存率的原因當中，除了疾病類型及藥物毒副作用等因素以外，化療藥物的耐藥是一個重要的原因。參與急性髓細胞白血?。ˋML）病人耐藥的機制有很多，其中研究較多的是多藥耐藥及與此表型相關的跨膜藥物輸出泵（例如P-gp,MRP等）的過度表達。在用蒽環(huán)類藥物和Ara-C聯(lián)合化療的AML病人，P-gp,MRP等的過度表達也導致了完全緩解率

2、（CR）的降低和生存時間的縮短，而有些AML病人雖沒有多藥耐藥基因的表達，但也無法達到疾病的緩解，提示可能有其它的機制參與了Ara-C的耐藥。 許多資料表明，細胞內(nèi)Ara-C的活性形式Ara-CTP的降低與臨床耐藥有密切的關系,而Ara-C代謝酶可能參與了AML病人的耐藥。Ara-C進入細胞后主要在脫氧胞苷激酶（deoxycytidine kinase，DCK）的作用下生成活性Ara-CTP，后者可以整合到DNA雙鏈中并引起DN

3、A的合成受阻，最終可以使細胞死亡。細胞內(nèi)的Ara-C也可在胞苷脫氨酶（cytidine deaminase，CDD)的作用下生成無活性的Ara-U排出體外。參與Ara-C的另一種重要的酶是核苷酸酶（cytoplasmic 5’-nucleotidase，5′-NT），它可以水解酯鍵使Ara-CMP脫磷酸，從而減少了Ara-CTP的聚集，引起細胞對Ara-C的敏感性降低。因此，Ara-C代謝酶的變化有可能會引起細胞內(nèi)Ara-CTP水平的變

4、化，最終導致細胞對Ara-C敏感性的變化。 研究表明，細胞內(nèi)Ara-CTP的水平除了與細胞內(nèi)上述Ara-C代謝酶有關，還與細胞膜上轉(zhuǎn)運Ara-C的載體有關。Ara-C在標準劑量（100-200mg/m2）時要依賴載體的轉(zhuǎn)運作用進入細胞，而人類平衡核苷體（hENT1）是Ara-C進入細胞的主要載體，現(xiàn)有研究表明hENT1與Ara-C耐藥密切相關，因此，Ara-C的耐藥可能與載體的數(shù)量和轉(zhuǎn)運效率有關。 在本研究中，應用六種血

5、液病細胞株對細胞內(nèi)Ara-C代謝酶的基因表達和細胞膜上平衡核苷轉(zhuǎn)運體基因表達進行了分析，旨在探討Ara-C代謝酶、平衡核苷轉(zhuǎn)運體與阿糖胞苷敏感性的關系。 本實驗分為三個部分： （一）用半定量PCR方法及實時熒光定量PCR反應檢測六種血液病細胞內(nèi)阿糖胞苷代謝酶的表達與阿糖胞苷敏感關系。實驗表明六種細胞株DCK的表達（△Ct值）與IC50值間呈正相關（r=0.88，P=0.021）。而CDD、5’NT的表達（△Ct值）和IC5

6、0值間無相關關系。 （二）用半定量PCR方法及實時熒光定量PCR反應檢測細胞膜上核苷轉(zhuǎn)運體基因的表達與阿糖胞苷敏感關系。實驗表明剔除K562細胞株，其余五種細胞膜上hENT1的表達（△Ct值）和IC50值間呈正相關（r=0.939，P=0.018）。其他亞型ENT表達（△Ct值）與IC50值間無相關關系。 （三）用實時熒光定量PCR反應檢測阿糖胞苷體外作用后六種血液病細胞株阿糖胞苷代謝酶基因與核苷轉(zhuǎn)運體基因的表達變化。實驗證