1、心肌肥厚作為心力衰竭的前奏，可增加心律失常、心肌梗死及猝死的發(fā)生率，被認為是心血管疾病的獨立危險因素之一。尼可地爾(Nicorandil，Nic)是近年來研制開發(fā)的一種兼有鈣拮抗作用的KATP通道開放劑。研究已證實，Nic除了能增加冠脈血流，減少心肌氧耗外，還可同時降低心臟的前、后負荷，且不引起反射性心動過速等作用。本研究通過建立不同動物心肌肥厚模型，運用免疫學、電生理學、分子生物學等實驗方法，從氧自由基損傷、能量代謝障礙、細胞動作電位

2、、細胞凋亡、細胞內鈣超載及相關基因表達諸方面探討Nic對實驗性心肌肥厚的作用及其機制，為Nic的臨床應用提供實驗依據。 第一部分尼可地爾抗心肌肥厚的藥效學研究 一、尼可地爾對異丙腎上腺素誘發(fā)小鼠心肌肥厚的保護作用 采用連續(xù)多次皮下注射小劑量異丙腎上腺素(isoproterenol，Iso)2mg·kg-1的方法建立小鼠心肌肥厚模型，觀察：Nic對小鼠心重指數和組織病理改變的影響；Nic對常壓密閉缺氧條件下小鼠存活

3、時間的影響；Nic對小鼠心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量的影響。結果顯示：(1)Nic明顯減輕小鼠心重指數和纖維化病理改變。(2)Nic延長心肌肥厚小鼠缺氧后存活時間(P＜0.05或P＜0.01)，增強整體動物在缺氧條件下的生存能力。(3)Nic提高肥厚心肌組織中SOD和GSH-Px活性，減少MDA含量，其中尤以中、高劑量組效果明顯(P＜0.05或P＜0.01)。 二

4、、尼可地爾對甲狀腺素誘發(fā)大鼠心肌肥厚的保護作用 采用連續(xù)腹腔注射左旋甲狀腺素(L-thyroxine，L-thy)建立大鼠心肌肥厚模型，檢測Nic對大鼠心肌線粒體組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Na+，K+-ATPase和Ca2++-ATPase活性的影響，同時使用KATP通道阻滯劑格列苯脲(glibenclamide，Glib)，觀察其對Nic作用的影響。研究發(fā)現：Nic能提高心肌線粒體組織中SOD活性，減少M

5、DA含量(P＜0.05或P＜0.01)；Nic能增加心肌線粒體組織中Na+，K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性(P＜0.01)。Glib可不同程度地減弱Nic對心肌線粒體組織的上述作用。 第二部分尼可地爾抗心肌肥厚的機制研究 一、尼可地爾對豚鼠心室乳頭狀肌動作電位的影響 本節(jié)以豚鼠心室乳頭狀肌為研究對象，采用標準微電極技術記錄心肌動作電位，研究Nic對心肌細胞動作電位的作用。本實驗檢測了在不同濃度條件

6、下，Nic對乳頭狀肌動作電位幅值(actionpotentialamplitude，APA)、動作電位時程(actionpotentialduration，APD)APD50及APD90的影響；沖洗換液后給予一定量的KATP通道阻滯劑Glib后，同樣在上述不同Nic濃度條件下，觀察Nic對AP作用的變化。結果發(fā)現：Nic可濃度依賴性的縮短動作電位的APD50及APD90，其中對APD90的影響尤為顯著(P＜0.01)，對APA無顯著作用

7、(P＞0.05)；當加入Glib后，心室乳頭狀肌細胞動作電位APD50和APD90的縮短率均顯著減小(P＜0.01)，這表明Glib可明顯減弱Nic對APD50及APD90的作用。 二、尼可地爾對心肌肥厚大鼠心肌細胞凋亡的影響 采用腹腔注射L-thy建立大鼠心肌肥厚模型。用免疫組織化學染色法觀察Nic對Fas和Bcl-2蛋白表達的影響。結果表明：與模型組比較，Nic可明顯抑制肥厚心肌組織Fas蛋白的表達(P＜0.01)，

8、促進Bcl-2蛋白的表達(P＜0.05或P＜0.01)。與單用Nic組相比，合用Glib后Fas蛋白表達明顯上調(P＜0.01)，而Bcl-2蛋白表達明顯下調(P＜0.01)。 三、尼可地爾對心肌肥厚大鼠c-fos、c-jun和TGF-β1表達的影響 采用定磷法測定大鼠心肌組織CaN活力，觀察Nic對其活力的影響；用半定量RT-PCR法檢測Nic對心肌組織增殖相關基因c-fos、c-jun和轉化生長因子β1(TGF-β1

9、)mRNA表達的影響；用ELISA法檢測Nic對心肌組織TGF-β1蛋白表達的影響。結果顯示：Nic可顯著降低心肌肥厚大鼠心肌組織CaN活力(P＜0.01)，減少c-fos、c-jun及TGF-β1mRNA含量(P＜0.05或P＜0.01)，下調TGF-β1蛋白的表達(P＜0.01)；Glib可減弱Nic的上述作用(P＜0.05或P＜0.01)。 結論： 1.Nic能顯著抑制Iso引起的小鼠心肌肥厚，此作用可能與Nic增

10、強心肌組織清除氧自由基能力、減少脂質過氧化物生成等有關。 2.Nic能顯著抑制L-thy誘發(fā)的大鼠心肌肥厚，此作用可能與Nic抑制心肌細胞線粒體脂質過氧化，顯著改善能量代謝等有關。 3.Nic可濃度依賴性的縮短心肌細胞動作電位的APD50及APD90，其中對APD90的作用更為顯著，Glib可減弱Nic對APD的作用，提示Nic縮短APD50及APD90的作用與其開放鉀通道關系密切。 4.Nic可抑制Fas蛋白的