1、目的： 基因甲基化在細(xì)胞的形成發(fā)育中發(fā)揮調(diào)控作用，目前關(guān)于其研究主要集中在啟動(dòng)子甲基化方面。雄激素受體(AndrogenReceptor，AR)啟動(dòng)子甲基化研究以往多集中在性激素依賴性腫瘤，而在性激素非依賴性腫瘤報(bào)道很少，在白血病中更未見相關(guān)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)利用MSP方法檢測(cè)白血病中AR啟動(dòng)子甲基化情況，揭示其異常甲基化狀態(tài)，同時(shí)利用去甲基化試劑5-AzaDC處理白血病細(xì)胞，分析處理前后AR基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)、mRNA和蛋白表達(dá)

2、的變化，分析5-AzaDC影響基因表達(dá)的可能機(jī)制，以揭示白血病AR基因啟動(dòng)子甲基化變化情況與基因表達(dá)的關(guān)系，為腫瘤的形成與DNA甲基化的關(guān)系提供理論依據(jù)，從而為腫瘤的治療提供新的方向。 方法： 1.白血病細(xì)胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat的培養(yǎng)以及5-AzaDC對(duì)細(xì)胞株的處理。 2.利用MSP檢測(cè)白血病細(xì)胞株和正常人白細(xì)胞AR基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)，分析兩者的差異。 3.利用MSP檢測(cè)在5-Az

3、aDC處理白血病細(xì)胞株后AR啟動(dòng)子CpG島甲基化狀態(tài)變化。 4.運(yùn)用：RT-PCR檢測(cè)5-AzaDC處理前后白血病細(xì)胞株ARmRNA的表達(dá)變化。 5.運(yùn)用免疫組化和westernblot分別檢測(cè)5-AzaDC處理前后AR蛋白的表達(dá)變化，同時(shí)察AR在細(xì)胞中的表達(dá)位置。 6.運(yùn)用MSP檢測(cè)白血病患者骨髓標(biāo)本AR啟動(dòng)子CpG島甲基化情況，分析白血病細(xì)胞AR啟動(dòng)子CpG島甲基化檢測(cè)的臨床診斷治療價(jià)值。 結(jié)果：

4、 1.MSP檢測(cè)白血病細(xì)胞株HL-60、MOLT-4、Jurkat和正常人白細(xì)胞AR啟動(dòng)子甲基化顯示：在三株白血病細(xì)胞，AR啟動(dòng)子CpG島檢出部分甲基化，而正常人白細(xì)胞顯示未甲基化。 2.5-AzaDC處理HL-60、MOLT-4、Jurkat后，AR啟動(dòng)子CpG島發(fā)生去甲基化。 3.白血病細(xì)胞中存在ARmRNA表達(dá)。 4.白血病細(xì)胞株經(jīng)5-AzaDC處理后ARmRNA表達(dá)發(fā)生變化，較處理前ARmRNA表達(dá)升

5、高。 5.白血病細(xì)胞株經(jīng)5-AzaDC處理后AR蛋白表達(dá)發(fā)生變化，較處理前AR蛋白表達(dá)升高。 6.利用MSP檢測(cè)15例白血病患者骨髓細(xì)胞AR啟動(dòng)子CpG島甲基化情況，結(jié)果在15例白血病患者骨髓標(biāo)本中均檢出AR基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化，其中12例(12/15)標(biāo)本呈部分甲基化狀態(tài)，3例(3/15)標(biāo)本呈高甲基化狀態(tài)。 結(jié)論： 1.白血病細(xì)胞株雄激素受體啟動(dòng)子CpG島存在異常甲基化狀態(tài)，而正常人白細(xì)胞為未甲基化

6、狀態(tài)，AR啟動(dòng)子甲基化可能是白血病的分子遺傳改變之一。 2.5-AzaDC可以使白血病細(xì)胞株AR啟動(dòng)子CpG島發(fā)生去甲基化，這種作用為表觀遺傳學(xué)紊亂調(diào)節(jié)的治療提供了新的方向。 3.白血病細(xì)胞株經(jīng)5-AzaDC處理后ARmRNA表達(dá)升高，說明去甲基化試劑5-AzaDC對(duì)AR基因的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)有一定的作用，AR基因mRNA表達(dá)的增加可能與AR啟動(dòng)子的去甲基化有關(guān)。 4.白血病細(xì)胞株經(jīng)5-AzaDC處理后AR蛋白表達(dá)存