1、目的：
　　 胰腺癌(pancreatic cancer)是一種惡性程度高,進(jìn)展迅速,手術(shù)切除率低,預(yù)后極差的惡性腫瘤,90％的病人在診斷后一年內(nèi)死亡,5年生存率僅3%～8%,因此,胰腺癌的早期診斷、早期治療對(duì)改善胰腺癌患者預(yù)后至關(guān)重要。啟動(dòng)子區(qū)CpG島的DNA甲基化發(fā)生在腫瘤形成的早期階段,被認(rèn)為是抑癌基因表達(dá)沉默的重要機(jī)制之一。人類Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-3(Runx3)基因在多種惡性腫瘤中存在啟動(dòng)子區(qū)CpG島高甲基化現(xiàn)象,但

2、Runx3基因在胰腺癌中的甲基化研究狀況國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。
　　 本研究采用甲基化特異性PCR(MSP)、PCR、Western blotting檢測(cè)胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1細(xì)胞及正常胰腺組織中Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化水平、mRNA及蛋白表達(dá)情況;并用5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-AZA-DCR)處理Panc-1、BxPC-3、AsPC-1細(xì)胞,檢測(cè)Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化水平、m

3、RNA及蛋白表達(dá)變化,探討人胰腺癌細(xì)胞中Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化水平,以及5-AZA-DCR對(duì)Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的去甲基化作用,為胰腺癌早期診斷及新的治療方案提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用MSP法檢測(cè)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1、正常胰腺組織及5-AZA-DCR處理后的胰腺癌細(xì)胞株中Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀況;
　　 2.利用RT-PCR法檢測(cè)P

4、anc-1、BxPC-3、AsPC-1、正常胰腺組織中Runx3基因的mRNA表達(dá)情況;
　　 3.運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)的Panc-1、BxPC-3、AsPC-1及5-AZA-DCR處理后三株胰腺癌細(xì)胞中Runx3基因的mRNA表達(dá)情況;
　　 4.利用Western blotting法檢測(cè)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1及5-AZA-DCR處理后的胰腺癌細(xì)胞株中Runx3基因的蛋白表達(dá)水平;
　　

5、結(jié)果：
　　 1.Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島均發(fā)生甲基化,而正常胰腺組織及5-AZA-DCR處理后Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島均未檢測(cè)到甲基化;
　　 2.Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中未檢測(cè)到Runx3基因mRNA表達(dá),正常胰腺組織可檢測(cè)到Runx3基因mRNA水平為1.3594±0.0059,兩組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義(P＜0.05)
　　 3.Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中Runx3基因mRNA水平分別為2.58±3.82、1.33±1.27、2.50±2.60:5-AZA-DCR處理后三株胰腺癌細(xì)胞中Runx3基因mRNA水平分別為398.90±33.95、227.03±58.53、28.09±9.70;每株細(xì)胞處理前后之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);處理后組中Panc-1、BxPC-3、AsPC-1之間比較差

7、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中未檢測(cè)到Runx3蛋白表達(dá):5-AZA-DCR處理后三株胰腺癌細(xì)胞中可檢測(cè)到Runx3蛋白,分別為0.56±0.02、0.43±0.02、0.32±0.02,處理前后之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中存在Runx3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化現(xiàn)象;<