1、慢性腎臟病(chromc kidney diseases，CKD)已成為一種世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。CKD患者腎功能進(jìn)行性喪失不僅與腎小球硬化有關(guān)，也與腎間質(zhì)纖維化(renalinterstitial fibrosis，RIF)的發(fā)展密切相關(guān)。RIF是各種原因引起的CKD進(jìn)展至終末期腎功能衰竭的共同途徑和病理基礎(chǔ)，RIF的早期防治對(duì)腎臟疾病的轉(zhuǎn)歸有重要意義。RIF的主要特征是正常腎小管和腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)被大量聚集的細(xì)胞外基質(zhì)(extracell

2、ular matrix，ECM)所代替。大量研究表明，腎小管．間質(zhì)的損害程度與腎功能的毀損密切相關(guān)，而腎小管上皮細(xì)胞(renal tubular epithelial cells，R17ECs)肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)在RIF過(guò)程中起著極其重要的作用。RTECs發(fā)生轉(zhuǎn)分化后，轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞(myofibroblast，MyoF)，表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Smooth muscle actin，α-SMA)，分泌ECM，促進(jìn)R

3、IF。 白細(xì)胞介素18(IL-18)是一種主要由活化的單核-巨噬樣細(xì)胞分泌的多功能細(xì)胞因子，我們以前的研究表明在多種CKD中均有IL-18的表達(dá)和分泌異常，并且IL-18的表達(dá)量與腎小管一間質(zhì)的損害程度呈正相關(guān)。我們進(jìn)行的體外研究也顯示了IL-18可促進(jìn)RTECs轉(zhuǎn)分化和凋亡，故IL-18參與了腎小管-間質(zhì)的損傷，但其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚未明確。本課題擬通過(guò)研究IL-18誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)轉(zhuǎn)分化作用的

4、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，探討RIF的阻斷途徑，為CKD的抗腎纖維化治療尋找新的靶點(diǎn)。 【方法】 應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)HK．2細(xì)胞。分別予不同濃度的JNK通路特異性阻斷劑SP600125(0、5、10、20μmol/L)、p38MAPK通路特異性阻斷劑SB203580(0、5、10、20μmol/L)預(yù)孵育細(xì)胞30min后，再加入IL-18(100ng/ml)共同培養(yǎng)，于24、48、72小時(shí)檢測(cè)α-SMA的表達(dá)。運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚

5、合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)α-SMA信使核糖核酸(mRNA)的表達(dá)水平。采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞胞漿中α-SMA的表達(dá)水平。 【結(jié)果】 1．SB203580可明顯抑制IL-18誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá)予不同濃度的SB203580(0、5、10、20gmol/L)預(yù)孵育細(xì)胞30min后，再加入IL-18(100ng/ml)共同培養(yǎng)24、48、72h，分別用RT-PCR法和ELIS

6、A法檢測(cè)其對(duì)HK-2細(xì)胞表達(dá)α-SMA mRNA和蛋白的影響。結(jié)果顯示SB203580呈劑量依賴性地抑制IL-18誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá)。 2．SP600125抑制IL-18誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞旺α-SMA基因和蛋白的表達(dá)予不同濃度的SP600125(0、5、10、201amol/L)預(yù)孵育細(xì)胞30min后，再加入IL-18(100ng/ml)共同培養(yǎng)24、48、72h，分別用RT-PCR法和ELISA法檢測(cè)