1、對于為以修復重建為主要宗旨的整形外科及以年輕化為核心的美容醫(yī)學而言，再生醫(yī)學一直是備受關注與研究探索的領域。再生醫(yī)學的發(fā)展離不開組織工程技術的支持。組織工程(tissueengineering)是應用生命科學與工程學的原理與技術，在正確認識哺乳動物的正常及病理兩種狀態(tài)下的組織結構與功能關系的基礎上，研究、開發(fā)用于修復、維護、促進人體各種組織或器官損傷后的功能和形態(tài)的生物替代物的一門新興學科。組織工程研究最重要的基本要素之一，是種子細胞的

2、研究。怎么能獲得數(shù)量充足、功能良好、來源廣泛、取材便捷的種子細胞，成為組織工程學研究的主要對象。組織工程只需要少量的種子細胞，經(jīng)體外擴增后與生物材料復合，就可以修復較大的組織或器官缺損，重建生理功能，為真正實現(xiàn)無損傷修復組織缺損和真正意義上的形態(tài)、結構與功能重建開辟了新的途徑。
　　 干細胞(stemcells，SC)因其擴增能力強、具有多向分化能力的特點，理論上可以利用少量干細胞培育出多種組織共存的組織工程產(chǎn)品，而且可以在干細

3、胞水平進行基因修飾，然后在體外擴增，得到同一基因型的大量分化細胞，可以做為良好的種子細胞，逐漸成為組織工程研究的主要對象。目前干細胞按照所處的發(fā)育階段分為：胚胎干細胞(embryonicstemcell，ESC)和成體干細胞(somaticstemcell)。胚胎干細胞具有分化為幾乎全部組織和器官的能力，在理論上具有作為種子細胞最理想的效果。但是對于人胚胎干細胞的研究工作卻受著各種倫理學方面和法律方面因素的制約，限制了其應用，不能成為良

4、好的種子細胞來源。在成體干細胞的研究方面，脂肪來源干細胞(Adipose-DerivedStemCells，ASCs)因其具有多向分化潛能和自我增殖能力，免疫相容性良好，來源豐富，取材容易等優(yōu)點，成為組織工程的種子細胞的熱點研究對象，具有不可多得的優(yōu)勢和應用前景。
　　 尤其對于整形外科而言，脂肪做為體形雕塑過程中的“廢棄物”，如果可以更好的利用，將為整形外科帶來更廣大的治療空間。本文主要研究從人脂肪抽吸物中提取原代的ASCs，

5、并將提取的ASCs添加入顆粒脂肪移植物中，形成脂肪-干細胞復合物，進行自體移植，實現(xiàn)面部軟組織輪廓的重塑。希望從此研究中，可以尋求一種能將手術創(chuàng)傷減低、術中操作相對容易、術后治療效果穩(wěn)定三者更好結合的手術方式。但是ASCs在臨床中的療效仍需進一步觀察。
　　 一、人脂肪來源干細胞的分離和培養(yǎng)
　　 目的:從健康女性患者自愿捐獻的人脂肪抽吸物中分離培養(yǎng)出具有高成脂能力的人脂肪來源干細胞(ASCs)，并在體外進行成脂誘導，為

6、標準化的脂肪來源干細胞輔助治療中的ASCs的制備提供指導。
　　 方法:從2例行腹部脂肪抽吸術的健康成年女性患者獲取脂肪組織，通過膠原酶消化法，分離培養(yǎng)ASCs，并進行傳代培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)；將第三代的ASCs進行流式鑒定，分析細胞表面標志物特性；將第三代的ASCs進行成脂誘導后，行油紅O染色，證實有無脂滴形成。
　　 結果:ASCs貼壁生長，形態(tài)為長梭形；細胞表面標志物顯示CD105+，CD49D+，CD45-，CD3

7、1-，CD34-；ASCs體外成脂誘導后，見大量脂滴形成，油紅O染色陽性。
　　 結論:該方法從人脂肪抽吸物中獲得的細胞，具有ASCs的形態(tài)和表面標志物特點，在體外可以經(jīng)誘導向脂肪細胞分化。
　　 二、脂肪來源干細胞輔助下的面部凹陷畸形治療
　　 目的:觀察將自體的顆粒脂肪與富集的含有原代脂肪來源干細胞的單個核細胞形成復合物，并將此復合物注射移植于患有面部凹陷畸形患者的面部凹陷部位得到的美容效果。
　　

8、方法:觀察及記錄接受脂肪來源干細胞輔助下面部凹陷畸形治療的16例患者的臨床資料，其中男性2人，女性14人，單側面部凹陷者10人，雙側面部凹陷者6人，共22側。采用可獲取含有原代人脂肪來源干細胞(ASCs)的單個核細胞的分離純化程序，獲取含有原代ASCs的單個核細胞，在體外與顆粒脂肪混合，靜置30min，形成脂肪-ASCs復合物，并將此復合物以螺旋可控注射器注射于面部凹陷部位。富集的含有原代ASCs的單個核細胞用細胞計數(shù)儀計數(shù)，算出顆粒細

9、胞總數(shù)，活細胞率，并留樣做菌培養(yǎng)，保證手術安全及質量。術前、術后3個月、術后6個月、術后12個月均采用牙模膠覆蓋于接受手術治療的凹陷部位塑性，將所得模型用排水法測得缺損體積，并與術中記錄的治療用量體積進行比對，算出脂肪移植的成活率。B超觀察患者術后注射部位的情況，有無結節(jié)、包塊、囊腫形成。
　　 結果:術后16例患者均獲滿意療效，隨訪12個月，記錄的數(shù)值用SPSS12.0軟件分析，每100ml脂肪可以提取富含原代ASCs的單個核

10、細胞為(2.52±0.50)×108個。配對t檢驗，術后3月、6月、12月患者移植物體積的P值均>0.05，在α=0.05水平，差異無統(tǒng)計學意義。說明術后3個月開始，脂肪成活已經(jīng)基本穩(wěn)定。脂肪移植存活率=(術前體積-術后體積)/術中體積×100％。術后3月、6月、12月脂肪移植存活率分別為(79.64±4.96)％、(82.67±6.12)％、(83.21±5.19)％，總的存活率為(81.84±5.59)％。B超檢查未見直徑大于2m的

11、結節(jié)、包塊、囊腫。
　　 結論:本手術方法安全、有效，脂肪移植后成活率高，且效果穩(wěn)定，有助于改善面部凹陷性畸形造成的軟組織輪廓改變。
　　 三、脂肪來源干細胞輔助下的面部年輕化治療
　　 目的:面部年輕化除皺手術已被廣泛應用，其手術效果也被大家認可和接受?？墒?，對于衰老造成的皮膚質量下降，手術是沒有辦法糾正的。脂肪來源干細胞(ASCs)的組織修復能力已被廣泛研究，結合這樣的臨床背景，我們將ASCs應用與接受面部年

12、輕化質量的患者，觀察ASCs在面部年輕化治療中的效果。
　　 方法:回顧性研究我院2009年6月至2011年8月間的20例來院接受面部除皺術患者的術前、術后資料，全部為女性。其中接受脂肪來源干細胞輔助下的面部年輕化治療患者10例，為A組，采用的除皺術式為顳部除皺；單純接受除皺手術患者10例，為B組，包括全面部除皺術3例，上2/3除皺術3例，額顳部除皺術4例。不論患者是否接受脂肪來源干細胞的輔助治療，也無論患者除皺手術的范圍大小，

13、均對面中部纖維脂肪墊進行連續(xù)懸吊處理，以排除手術方式的干擾。設定好具體的量化評分標準，結合VISIA專業(yè)皮膚圖像分析系統(tǒng)(美國)檢測患者術前術后患者面部情況，進行評分比較，并針對術前術后患者的評分進行分析。
　　 結果:術后隨訪3-15個月。大體評分結果，A組患者的術前評分為10.40±1.43，術后評分為1.90±0.88，B組患者的術前評分為9.70±1.89，術后評分為2.00±1.33，A組患者治療有效率為(82.45±

14、7.15)％，B組患者的治療有效率為(80.97±10.83)％。大體評分在A、B兩組組間比較的P值>0.05，在α=0.05水平，差異無統(tǒng)計學意義。說明兩組患者的治療效果無明顯區(qū)別，但是A組患者接受的除皺手術創(chuàng)傷相對較小。VISIA檢測在A、B兩組進行單獨比較，術前、術后紋理、皺紋方面的P值均<0.05，在a=0.05水平，差異有統(tǒng)計學意義。說明A組與B組患者術后在紋理和皺紋方面的改善，均很顯著。斑點、毛孔的P值均>0.05，在a=0

15、.05水平，差異沒有統(tǒng)計學意義。說明兩組患者術后在斑點和毛孔方面的改善，均不顯著。VISIA檢測在A、B兩組進行組間比較，毛孔、斑點改善的P值均<0.05，在a=0.05水平，差異有統(tǒng)計學意義，說明A組在斑點和毛孔方面的改善比B組明顯；兩組間在紋理、皺紋改善的P值均>0.05，在a=0.05水平，差異沒有統(tǒng)計學意義。說明兩組間在皺紋和紋理的改善方面沒有明顯區(qū)別。皺紋和紋理改善結果與大體評分結論基本一致。
　　 結論:脂肪來源干細