1、目的:
　　(1)改良體外分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,比較兩種來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的成長(zhǎng)特性;
　　(2)探索多種細(xì)胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)下,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的造血干細(xì)胞(ADMSC-HSCs)能否分化為同時(shí)表達(dá)CD3+CD56+的淋巴系免疫細(xì)胞,即CIK細(xì)胞。
　　方法:
　　(1)采用改良酶消化法分離提取人脂肪和臍帶標(biāo)本中的間充質(zhì)干細(xì)胞.通過(guò)貼壁培養(yǎng)純化細(xì)胞,記錄原代間充質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況;使用倒

2、置顯微鏡和吉姆薩染色觀察原代和傳代后兩種細(xì)胞形態(tài)差別;通過(guò)MTT法繪制生長(zhǎng)曲線比較兩種細(xì)胞的增殖速率;使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的特征表面分子。
　　(2)取第三代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,利用經(jīng)由細(xì)胞穿透肽轉(zhuǎn)染 shRNA(shRNA-337)并加入特定成分培養(yǎng)基誘導(dǎo)其定向分化,培養(yǎng)5天后,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞的造血干細(xì)胞特征性表面分子CD34、CD38、CD45表達(dá)情況。并收獲脂肪間充質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的造血干細(xì)胞(ADMS

3、C-HSCs)加入CIK誘導(dǎo)體系繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)7天、14天分別后檢測(cè)CIK細(xì)胞表面標(biāo)志分子CD3、CD56表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1)經(jīng)改良酶消化法均能成功獲得的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,脂肪充質(zhì)干細(xì)胞的原代細(xì)胞增殖速度較快。兩種間充質(zhì)干細(xì)胞均呈典型的短梭形、漩渦樣貼壁生長(zhǎng),臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體積較大。通過(guò)分析生長(zhǎng)曲線,臍帶間充質(zhì)細(xì)胞的倍增速度略快于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。兩種間充質(zhì)干細(xì)胞均表達(dá)CD29、CD44、

4、CD90、CD166間充干細(xì)胞特征表面分子,不表達(dá)CD34、CD45、CD49f、CD133。
　　(2)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞穿透肽轉(zhuǎn)染shRNA-337后,誘導(dǎo)培養(yǎng)5天,細(xì)胞形態(tài)和分子表型均發(fā)生改變,ADMSC-HSCs呈集落樣懸浮生長(zhǎng),產(chǎn)生CD34, CD38,CD45造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物;收獲后的ADMSC-HSCs經(jīng)CIK細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)體系培養(yǎng)后14天出現(xiàn)CD3,CD56高陽(yáng)性表達(dá),CIK效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞比率