1、目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、提取和體外擴(kuò)增的最佳條件,然后體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向軟骨細(xì)胞定向分化,并對分化后細(xì)胞進(jìn)行鑒定,為氣管軟骨組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),然后將培養(yǎng)的細(xì)胞在TGF-β1、地塞米松(Dex)、胰島素及維生素 C(Vit C)等誘導(dǎo)下進(jìn)行分化。在光鏡下觀察誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,然后用蘇木精-伊紅(HE)染色、甲苯胺藍(lán)染色等

2、方法檢測誘導(dǎo)細(xì)胞的分泌功能,并采用RT-PCR方法檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞中II型膠原(Col II)的表達(dá)。
　　結(jié)果:體外培養(yǎng)的原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)48小時內(nèi)可見有少量貼壁細(xì)胞,7天后貼壁細(xì)胞明顯增多,呈梭形柵欄樣或多邊形分布,9天后可見呈集落生長的細(xì)胞。BMSCs在轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、地塞米松(Dex)、胰島素及維生素C(Vit C)等作用下,7天后可見少量細(xì)胞由梭形變?yōu)椴灰?guī)則或橢圓形,隨后聚集形成軟骨樣結(jié)節(jié)。