1、本課題將當歸多糖作為載體材料制備當歸多糖磁性納米粒,并將其與目前市場上常用的兩種多糖包覆的磁性納米粒進行體內外性狀的比較研究,考察當歸多糖作為磁性納米載體材料的可行性。本實驗主要從五個方面進行比較研究:制備方法、質量控制、體外表征、體內分布和載藥性能。
　　第一部分：三種多糖包覆的磁性納米粒的制備
　　以岷縣當歸為原料,采用水提醇沉,氫氧化鈣去鞣質的方法從當歸根莖中提取當歸多糖浸膏;采用苯酚-硫酸法測定當歸多糖浸膏糖含量;采

2、用化學共沉淀法制備三種磁性納米粒;通過比較產(chǎn)品表觀性狀、水溶性、磁響應性和粒徑分布,初步評估制備方法的可行性,選擇體外穩(wěn)定性較好的磁性納米粒作為參比試劑,進行后續(xù)的比較研究;比較磁傾析法和動態(tài)透析法兩種不同的純化方式,最終選用動態(tài)透析法純化得到兩種精制磁性納米粒,分別命名為當歸多糖磁性納米粒(Asp-Fe3O4)和葡聚糖磁性納米粒(Dex-Fe3O4);分別采用苯酚-硫酸法和鄰二氮菲法測定磁性納米粒的糖含量和鐵含量,以初步評估兩種磁性納

3、米粒外層多糖的包覆量。實驗結果表明:當歸多糖浸膏的糖含量為67.72％;當歸多糖磁性納米粒和葡聚糖磁性納米粒具有良好的體外性狀,表現(xiàn)為水溶性良好,粒徑分布均勻,磁響應性強,殼聚糖磁性納米粒體外穩(wěn)定性較差,表現(xiàn)為水溶性差,體外易團聚;當歸多糖磁性納米粒的糖含量為16.13%,Fe3O4含量為68.90%,葡聚糖磁性納米粒的糖含量為39.80%,Fe3O4含量為49.50%。綜上所述,初步確定當歸多糖可作為磁性納米粒的載體材料,成功制備當歸

4、多糖磁性納米粒;葡聚糖磁性納米粒體外性質穩(wěn)定可作為參比制劑,進行后續(xù)的比較研究;殼聚糖磁性納米粒不適于作為本實驗的參比制劑,進行后續(xù)的比較研究。
　　第二部分：兩種多糖包覆的磁性納米粒的體外表征比較
　　采用第一部分確定的制備工藝合成當歸多糖磁性納米粒和葡聚糖磁性納米粒,并對兩種磁性納米粒的理化性質進行考察,評價當歸多糖磁性納米粒的體外表征。通過傅里葉紅外光譜儀確定多糖和磁核Fe3O4的連接狀況,通過X射線衍射儀分析磁性納米

5、粒的純度和晶型結構,通過透射電鏡和激光粒度分析儀觀察磁性納米粒的形態(tài)和粒徑分布,通過振動樣品磁場計考察磁性納米粒的磁學性能。傅里葉紅外光譜圖顯示兩種多糖成功包覆于磁核Fe3O4表面,并與磁核表面的官能團形成穩(wěn)定的化學鍵;X射線衍射圖譜顯示磁性納米粒的主要成分為Fe3O4晶體,晶體純度高;透射電鏡和激光粒度分析圖譜顯示兩種磁性納米粒均為橢球形,分散性良好,二者的平均水合粒徑分別為82.3nm和75.4nm;磁化曲線圖譜顯示兩種磁性納米粒均

6、具有超順磁性,二者的飽和磁化強度分別為21emu/g和22emu/g。通過比較兩種磁性納米粒的體外表征發(fā)現(xiàn):與Dex-Fe3O4相比較,當歸多糖磁性納米粒體外表征性狀良好,適于進行后續(xù)的體內分布的比較研究。
　　第三部分：兩種多糖包覆的磁性納米粒的體內靶向分布研究
　　通過比較兩種磁性納米粒在大鼠體內的分布代謝情況,對二者的體內穩(wěn)定性和分布行為進行評價。以SD雄性大鼠為模型動物,采用尾靜脈給藥方式,考察在未置磁鐵和外置磁鐵兩

7、種情況下磁性納米粒在大鼠體內的鐵處置狀況。采用原子吸收光譜法,以臟器鐵為檢測指標,分析兩種磁性納米粒在大鼠心、肝、脾、肺和腎的含量變化;采用普魯士藍染色法,以鐵離子為檢測目標,考察兩種磁性納米粒在大鼠肝臟和腎臟的鐵離子分布狀況。實驗結果表明:未置磁鐵時,兩種磁性納米粒在體內均具有良好的被動靶向性,葡聚糖磁性納米粒被動靶向于肝、脾和肺,當歸多糖磁性納米粒被動靶向于脾和肺;外置磁鐵時,兩種磁性納米粒均能夠表現(xiàn)出良好的肝臟靶向性,即主動靶向性

8、。通過比較兩種磁性納米粒的體內靶向分布進一步確證,當歸多糖磁性納米粒體內性狀穩(wěn)定,適于進行載藥性能的比較研究。
　　第四部分：兩種磁性納米粒的載藥性能考察
　　采用反相微乳法,以5-FU為模型藥物,戊二醛為交聯(lián)劑,制備兩種載藥磁性納米粒,分別命名為載藥當歸多糖磁性納米粒(5-FU-Asp-Fe3O4)和載藥葡聚糖磁性納米粒(5-FU-Dex-Fe3O4)。體外考察兩種載藥磁性納米粒的粒徑、載藥率、包封率、磁響應性和釋藥特征,

9、比較兩種磁性納米粒的載藥性能。通過激光粒度分析儀評價載藥磁性納米粒的粒徑分布,通過紫外分光光度法檢測載藥磁性納米粒的載藥率和包封率,通過溶出度實驗考察載藥磁性納米粒在PBS緩沖溶液的釋藥特征,通過沉降法比較兩種載藥磁性納米粒的磁響應性。實驗結果表明:5-FU-Asp-Fe3O4和5-FU-Dex-Fe3O4載藥后粒徑增大,約260nm,分散度明顯減小;5-FU-Asp-Fe3O4的載藥率為8.98%,包封率為39.30%;5-FU-De