1、目的：
　　建立永久性腦缺血模型，觀察腦梗死后ERK1/2和ROCK兩條信號通路的變化及分別應(yīng)用ERK1/2和ROCK阻斷劑探討這兩條信號通路如何通過相互作用激活其共同的下游效應(yīng)分子PARP-1進(jìn)而來調(diào)控腦梗死后神經(jīng)血管單元的存亡。
　　方法:
　　一、SPF級健康、雄性SD大鼠60只，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供，體重250～300g，實驗前12h禁食，自由飲水。采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S)和腦梗死

2、組(M)，腦梗死組采用大腦中動脈線栓法建立大腦中動脈腦缺血模型(MCAO模型)，假手術(shù)組的制作方法除大腦中動脈不插線外余步驟同制作MCAO模型，每組根據(jù)腦梗死后時間不同又分為1h，3h，12h，24h，3d，7d六個亞組，每個組5只大鼠。分別采用神經(jīng)功能評分表檢測各組神經(jīng)功能及Western Blot方法分別檢測各亞組ERK1/2、p-ERK1/2、ROCK蛋白表達(dá)水平。
　　二、SPF健康、雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為四組:對照

3、組(S)，模型組(M)，U0126組(U)，F(xiàn)asudil組(F)，U0126+Fasudil組(U+F)。對照組、U0126組、Fasudil組、U0126+Fasudil組分別在模型制作前30min及造模成功后12h給予大鼠尾靜脈注射DMSO、ERK1/2抑制劑U0126(30mg/Kg)、ROCK抑制劑Fasudil(10mg/Kg)、U0126(30mg/Kg)+ Fasudil(0.5mg/Kg)。腦梗死24小時后，分別檢測各

4、組神經(jīng)功能、腦梗死面積以及腦梗死側(cè)大腦皮層ROCK、p-ERK1/2及PARP-1的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　一、假手術(shù)組各個時間點總ERK1/2和p-ERK1/2表達(dá)相同。腦梗死組各個時間點的總ERK1/2表達(dá)不變，而p-ERK1/2隨時間的延長表達(dá)逐漸升高，24h時達(dá)最高峰，隨后p-ERK1/2水平逐漸降低。與假手術(shù)組相應(yīng)時間點比較，1h、3h組p-ERK1/2的表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)，然而，12h、24h

5、組p-ERK1/2水平明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，3d和7d p-ERK1/2的表達(dá)仍高于對照組，對比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。ROCK Western blot結(jié)果顯示:假手術(shù)組各亞組 ROCK的表達(dá)相同。腦梗死組ROCK的表達(dá)隨時間的延長逐漸升高，12h表達(dá)達(dá)高峰，隨后表達(dá)下降。與假手術(shù)組相應(yīng)時間點相比，腦梗死3h、12h和24h組ROCK水平明顯升高(P＜0.05)，3d后ROCK表達(dá)與假手術(shù)組相比無差異(P＞0.05)

6、。神經(jīng)功能結(jié)果顯示:假手術(shù)組不出現(xiàn)神經(jīng)功能缺陷癥狀，腦梗死組大鼠清醒后即出現(xiàn)肢體功能障礙，24h組肢體功能評分最高（2.8±0.45），其后降低，7d神經(jīng)功能評分降至(1.2±0.45)。
　　二、模型組與對照組相比，p-ERK1/2、ROCK及PARP-1的表達(dá)顯著提高(P＜0.05);與模型組相比，F(xiàn)asudil組p-ERK1/2及ROCK的表達(dá)下降，而U0126組p-ERK1/2的表達(dá)下降，而ROCK表達(dá)并無變化;與模型組相

7、比，F(xiàn)asudil組、U0126組及Fasudil組+U0126組PARP-1的表達(dá)顯著下降，其中以U0126+Fasudil組下降最為顯著;模型組與對照組相比，大鼠表現(xiàn)出顯著的神經(jīng)功能缺損癥狀，神經(jīng)功能評分增高(2.8±0.45，P＜0.05)，腦梗死面積較大(26.8±3％，P＜0.05)。分別與模型組、U0126組、Fasudil組相比，U0126+Fasudil治療組神經(jīng)功能明顯改善，神經(jīng)功能評分(1.3±0.5，P＜0.05)

8、，腦梗死面積(15.8±2％，P＜0.05)均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　一、我們的研究發(fā)現(xiàn)ERK1/2和ROCK分別介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)兩條重要的信號通路，參與細(xì)胞的增殖、生長和發(fā)育等生物學(xué)功能。研究顯示，腦梗死后ERK1/2和ROCK信號通路的調(diào)控與神經(jīng)細(xì)胞的生存和死亡密切相關(guān)。我們實驗結(jié)果證明腦梗死后24h神經(jīng)功能損傷最重，而ERK1/2的表達(dá)最高，由此我們推斷ERK1/2的過度激活與神經(jīng)功能損傷程度有關(guān)。

9、此時，ROCK的表達(dá)較高，表明ERK1/2和ROCK在腦梗死后發(fā)生了不同調(diào)節(jié)，參與神經(jīng)損傷與修復(fù)。關(guān)于ERK1/2和ROCK在腦梗死后如何調(diào)節(jié)及可能的機(jī)制不是很清楚，需要我們進(jìn)一步探索，所以我們設(shè)計下一步實驗。
　　二、分別應(yīng)用這ROCK和ERK1/2的阻斷劑顯示:ROCK阻斷劑對ERK1/2有一定的阻斷作用，然而ROCK的表達(dá)不受ERK1/2阻滯劑的影響，由此我們推斷ERK1/2可能作為ROCK的下游效應(yīng)分子發(fā)揮作用。PARP-