1、[目的]
　　由少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(OPCs)參與的脊髓損傷(SCI)后軸突的再髓鞘化過(guò)程是一個(gè)內(nèi)源性的修復(fù)過(guò)程，其對(duì)挽救殘留軸突，促進(jìn)后期功能恢復(fù)具有重要的作用。
　　神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(NTs)作為一類重要的調(diào)控因子，對(duì)損傷后神經(jīng)的再生修復(fù)具有重要的調(diào)節(jié)作用。但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體(proNTs)對(duì)神經(jīng)的損傷后修復(fù)具有廣泛的抑制作用。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn):腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體(pro-Brain-Deriv

2、ed Neurotrophic Factor，proBDNF)不僅直接抑制軸突的再生和延伸，而且抑制損傷后巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性浸潤(rùn)反應(yīng)，特別是影響損傷局部有害物質(zhì)的清除，提示proBDNF對(duì)于損傷后修復(fù)的影響不僅僅限于神經(jīng)元本身。
　　基于上述原因，本實(shí)驗(yàn)研究擬觀察腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體(proBDNF)對(duì)OPCs增殖分裂及遷移的影響。并進(jìn)一步探討其與p75NTR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。
　　[方法]
　　本研究分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

3、和體外實(shí)驗(yàn)兩部分。
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用proBDNF抗體治療SD大鼠T9脊髓損傷模型，觀察損傷后BBB評(píng)分的改善情況;應(yīng)用免疫熒光染色觀察p75及sortilin在OPCs上的表達(dá)以及損傷部位OPCs的分裂及遷移情況，評(píng)估proBDNF及其抗體對(duì)于OPCs生物學(xué)活性的影響;初步探討proBDNF作用與p75信號(hào)通路的關(guān)系。
　　體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞系OLN-93作為研究對(duì)象，測(cè)定不同濃度梯度proBDNF對(duì)于O

4、LN-93細(xì)胞分裂增殖活性的影響;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察proBDNF對(duì)OLN-93細(xì)胞遷移活性的影響;應(yīng)用免疫熒光染色和western-blot方法觀察OLN093細(xì)胞表面p75、sortilin及內(nèi)源性proBDNF的表達(dá);針對(duì)proBDNF和p75分子，觀察應(yīng)用不同阻斷劑治療后對(duì)OLN-93細(xì)胞活性的影響，討論proBDNF作用與p75NTR信號(hào)途徑的關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　內(nèi)源性的proBDNF抑制SCI后OPCs的

5、增殖分裂和遷移過(guò)程。BrdU染色表明proBDNF治療組的大鼠脊髓內(nèi)損傷區(qū)域處于分裂階段的OPCs細(xì)胞數(shù)量明顯減少。同時(shí)應(yīng)用proBDNF抗體對(duì)proBDNF進(jìn)行特異性拮抗后OPCs的增殖活性顯著提高，功能恢復(fù)也明顯優(yōu)于對(duì)照組。
　　體外實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)proBDNF對(duì)OLN-93細(xì)胞的分裂增殖具有明顯的抑制作用，且這一作用具有濃度依賴性，其隨著proBDNF濃度的升高而增強(qiáng)。proBDNF抗體可以特異性拮抗proBDNF的作用，且不具

6、有明顯的濃度依賴。
　　OLN-93細(xì)胞的劃痕實(shí)驗(yàn)證明了proBDNF抑制OPCs細(xì)胞的遷移而proBDNF抗體則對(duì)細(xì)胞的遷移具有促進(jìn)作用。
　　體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)OPCs細(xì)胞表達(dá)內(nèi)源性proBDNF及其受體p75NTR和sortilin。應(yīng)用可溶性重組蛋白p75NTRecd-FC及p75NTR特異性抗體的治療結(jié)果提示proBDNF通過(guò)p75NTR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)對(duì)OPCs增殖和遷移的抑制作用。
　　[結(jié)論]