1、背景與目的：
　　葡萄酒色斑(Port-wine Stain，PWS)又名鮮紅斑痣，為先天性毛細血管畸形。在新生兒當中的發(fā)生率約為0.3-0.5％，其具有穩(wěn)定龐大的發(fā)病人群。上世紀90年代我國首次將光動力療法(Photodynamic Therapy，PDT)應(yīng)用于PWS的治療，獲得了顯著的療效。隨著光敏劑的發(fā)展，結(jié)合第二代光敏劑:海姆泊芬(HMME) PDT成為治療PWS的新的主流選擇。
　　治療后病灶皮膚壞死作為其嚴重并

2、發(fā)癥之一，影響了HMME-PDT治療的普及。同時，當因療效不佳需探索新的光源及相應(yīng)參數(shù)時，同樣受制于治療后皮膚壞死的限制。故探究HMME-PDT治療后皮膚壞死的發(fā)生機制，探索怎樣避免該嚴重并發(fā)癥，具有十分重要的意義。
　　針對HMME-PDT治療后出現(xiàn)皮膚壞死機制的研究，國內(nèi)外尚無文獻報道。根據(jù)接受HMME-PDT治療的患者長期密切隨訪，以及HMME-PDT治療后出現(xiàn)皮膚壞死及瘢痕愈合的病程及臨床表現(xiàn)，推測該并發(fā)癥的發(fā)生可能由于治

3、療中過于激進的PDT參數(shù)調(diào)整或其他個人因素，導(dǎo)致真皮下血管網(wǎng)的過度破壞，出現(xiàn)皮膚壞死。
　　本研究通過幼豬皮膚作為動物模型，探究在不同波長激發(fā)光源及不同能量下破壞的皮下血管顯微構(gòu)筑，了解皮膚壞死等并發(fā)癥的病理基礎(chǔ)及規(guī)律。將為闡明該嚴重并發(fā)癥機制提供實驗證據(jù)。
　　材料與方法：
　　材料:本研究包括2月齡中國小型豬（白色）10只，其中5只雄性5只雌性（其中實驗部位為幼豬腹部皮膚，備皮后使用）。上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限

4、公司提供的光敏劑海姆泊芬HMME（復(fù)美達(@)）12支（100mg/支）。半導(dǎo)體激光器（波長:630nm）、倍頻Nd: YAG激光器（波長:532nm）各1臺。相關(guān)標本處理工具、動物麻醉藥物若干、CD31免疫組化染色工具、TUNEL法檢測細胞凋亡試劑盒及病理圖片處理與統(tǒng)計軟件(Image-Pro Plus6.0)。
　　方法:構(gòu)建幼豬皮膚動物模型，模擬正常人類皮膚。實驗使用532nm、630nm激發(fā)光源及不同能量密度(80～160

5、mW/cm2)，使用光敏劑海姆泊芬(高劑量5mg/Kg)。
　　(1)記錄治療后不同時段皮膚反應(yīng)。
　　(2)接受不同激發(fā)光源及不同能量治療的區(qū)域分別切取病理切片，通過免疫組化及特殊染色觀察觀察靶區(qū)域顯微血管構(gòu)筑破壞與皮膚壞死的關(guān)系。
　　(3)在同一部位治療后即時、2天、4天、7天，15、20天分別切取病理切片，通過免疫組化及特殊染色觀察血管構(gòu)筑破壞隨時間改變情況。
　　(4)聯(lián)合630nm及532nm光源相互

6、覆蓋，觀察皮膚安全性，并通過病理切片觀察顯微血管構(gòu)筑破壞情況。
　　結(jié)果：
　　10只實驗動物中1只于實驗觀察階段因肺部感染死亡。
　　2只實驗動物(a、b)中等能量密度100mW/cm2（40分鐘照射）光動力治療。630nm光斑處3天后出現(xiàn)輕微結(jié)痂，532nm光斑處無明顯皮膚反應(yīng)。20天觀察終止，兩者皆未出現(xiàn)皮膚損害。4只實驗動物(c、d、e、f)接受較高能量密度120-130mW/cm2（630nm光斑照射40分鐘

7、，532nm光斑照射60分鐘）光動力治療。4只動物兩組光斑3天后皆出現(xiàn)結(jié)痂。20天觀察終止，其中3只630nm光斑處出現(xiàn)壞死后瘢痕形成(75％)，532nm光斑處無一出現(xiàn)壞死及瘢痕(0％)。1只實驗動物(g)接受高能量密度140-150mW/cm2（40分鐘照射）光動力治療。630nm與532nm光斑處3天后皆出現(xiàn)較厚痂皮。20天觀察終止，皆出現(xiàn)皮膚損害潰瘍未愈。1只實驗動物(h)接受極高能量160mW/cm2（15分鐘照射）光動力治療

8、。630nm與532nm光斑處3天后皆出現(xiàn)較厚痂皮。20天觀察終止，兩者潰瘍愈合趨勢，厚痂逐漸軟化，無明顯瘢痕形成。1只實驗動物(i)接受較低能量密度80mW/cm2（40分鐘照射）光動力治療，部分光斑重合覆蓋。630nm光斑處及重合覆蓋處3天后出現(xiàn)結(jié)痂，532nm光斑處未重合區(qū)無明顯皮膚反應(yīng)。20天觀察終止，兩者皆未出現(xiàn)皮膚損害。
　　相關(guān)免疫組化及TUNEL試驗表明:630nm激發(fā)光源所破壞的血管構(gòu)筑為深度1144.0um(1

9、067.495um-1271.213um)的皮下血管網(wǎng)。532nm激發(fā)光源所破壞的血管構(gòu)筑為深度921.9um(850.47um-999.753um)的皮下血管網(wǎng)。鏡下觀察表明:光動力治療破壞血管構(gòu)筑隨時間無明顯深度變化，治療后3天可觀察到表皮失營養(yǎng)破壞，15-20天出現(xiàn)表皮及真皮血管重構(gòu)或瘢痕形成。
　　結(jié)論：
　　532nm光源的安全性始終令人滿意（尤其在120-130mW/cm2，60分鐘的治療中，表現(xiàn)良好）。630n