1、本文采用由差異顯示技術(shù)從大鼠血糖調(diào)節(jié)模型中克隆得到一個血糖調(diào)節(jié)相關(guān)基因作為研究對象，即葡萄糖刺激后表達上調(diào)的Prominin基因。Prominin屬于一個新的五次跨膜糖蛋白家族，該家族與任何已知蛋白均無明顯同源性，且特異性定位于細胞膜突起的頂端。目前，這個蛋白家族的生物學功能尚不明了，僅能夠根據(jù)些許線索推測出其與細胞骨架關(guān)系密切。 本文在細胞水平對Prominin與葡萄糖代謝之間的關(guān)系進行了研究。在大鼠L6肌管細胞中，采用rea

2、l-time PCR技術(shù)對葡萄糖刺激后的Prominin mRNA水平進行檢測后發(fā)現(xiàn)，隨著葡萄糖刺激時間的延長，其mRNA的含量也逐漸升高。這與大鼠整體實驗模型中得到的結(jié)論一致。在野生型不表達Prominin的MDCK腎小管內(nèi)皮細胞中，使用自制的抗Prominin多克隆抗體通過免疫共沉淀技術(shù)得到Prominin蛋白，對其進行體外磷酸化實驗，發(fā)現(xiàn)了包括第二個胞內(nèi)區(qū)在內(nèi)的多個PKC磷酸化位點。采用高濃度葡萄糖和胰島素分別刺激誘導完全的L6肌

3、管細胞，發(fā)現(xiàn)葡萄糖能夠引起Prominin磷酸化程度呈現(xiàn)先輕度增加、后大幅下降的變化，而胰島素能夠逆轉(zhuǎn)該變化，使之對葡萄糖刺激不敏感。 根據(jù)Prominin的亞細胞定位特征和其他實驗室的研究結(jié)果，我們探討了其參與細胞骨架運動的可能性。在野生型不表達Prominin的MDCK細胞中，Prominin的表達使之形態(tài)發(fā)生明顯改變，細胞體積變大，邊界清晰，出現(xiàn)大而細長的突起，呈分散生長：也使：MDCK細胞的遷移能力顯著增強，達到對照的4

4、倍以上。采用酵母雙雜交技術(shù)對大鼠骨骼肌文庫進行篩選，得到了與Prominin第一個胞內(nèi)區(qū)結(jié)合的細胞骨架蛋白Myotilin，并且免疫共沉淀和細胞內(nèi)共定位的實驗結(jié)果也驗證了所述結(jié)合的存在。在L6細胞中，隨著細胞的接觸和分化，Prominin蛋白的含量逐漸下降；隨著細胞的死亡和去接觸，其蛋白含量逐步增加。 基因芯片是近年來出現(xiàn)的新技術(shù)，可用于高通量研究基因表達譜，篩選差異表達基因。通過該技術(shù)，我們對42例2型糖尿病患者和正常對照的骨