1、研究背景帕金森病(Parkinson disease，PD)是一種常見于中老年人的第二大神經(jīng)退行性疾病，為老年人兩大慢性殺手之一。隨著老齡化社會的來臨，PD患病率正在世界范圍內(nèi)逐年增高，據(jù)世界帕金森病協(xié)會資料顯示，全球現(xiàn)有超過400萬帕金森病患者。我國目前約有帕金森病患者172萬，居全球第一，而且每年還要新增約10萬患者。因此帕金森病已經(jīng)成為我國乃至世界各國面臨的重大醫(yī)學和社會問題。 研究表明：中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性缺失伴胞

2、漿內(nèi)Lewy小體的形成是帕金森病的主要病理改變，而Lewy小體內(nèi)主要聚集有a-突觸核蛋白(a-synuclein)、泛素(ubiquitin)等蛋白。越來越多的證據(jù)顯示Lewy小體的形成與泛素蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system，UPS)功能缺損密切相關(guān)。目前，在治療上，人們普遍采用以左旋多巴為主的替代療法，雖然在緩解PD患者癥狀上有一定療效，但同時也會出現(xiàn)一些嚴重的毒副作用，且不能有效阻止病情的發(fā)展。近

3、年來的研究證實：中藥治療PD療效確切，在延緩疾病的進程，減輕西藥治療后的不良反應，控制PD的一些非運動障礙癥狀等方面發(fā)揮了重要作用。但目前對中藥治療PD的機理探討上，國內(nèi)還多局限于從氧化應激、細胞凋亡、興奮性氨基酸毒性、免疫反應等方面入手，未見對本病關(guān)鍵性病理環(huán)節(jié)UPS的研究。 本課題所采用的中藥復方安顫靈為導師吳正治教授在承擔國家十五科技攻關(guān)項目“帕金森病中西醫(yī)結(jié)合綜合治療優(yōu)化方案研究”工作期間，以古今文獻相關(guān)方藥的系統(tǒng)整體為

4、基礎(chǔ)，結(jié)合多年科研和臨床經(jīng)驗，并根據(jù)其提出的本病新的中醫(yī)病機假說——“脾濕困阻、氣機不暢、肌肉失主”，以理脾化濕為主，輔以行氣活血、柔肝止痙立法組方，經(jīng)反復篩選優(yōu)化而成的純天然中藥復方。經(jīng)過多年臨床應用，對早中期帕金森病療效顯著，對晚期和多巴胺制劑失敏的帕金森病患者也有一定療效。 研究目的：本課題采用lactacystin制作泛素一蛋白酶體系統(tǒng)損傷的細胞模型，研究泛素一蛋白酶體系統(tǒng)功能損傷后細胞凋亡，a-synuclein、ub

5、iquitin、及TH表達的變化，并利用Tunel、免疫細胞化學方法觀察安顫靈含藥血清在抗凋亡及改善UPS功能等方面的作用機制，旨在為中藥安顫靈治療PD提供實驗依據(jù)，為PD治療提供新的思路。 研究方法按照血清藥理學實驗方法制備安顫靈含藥血清，采用lactacystin作用于Pcl2細胞，建立泛素一蛋白酶體系統(tǒng)損傷的細胞模型。將含藥血清分為大、中、小劑量組，MTT方法檢測各組的細胞活力；將對數(shù)生長期的PC12細胞分為正常組、lac

6、tacystin組(損傷組)、中藥組，通過Tune1及免疫細胞化學方法，觀察各組細胞凋亡，及a-synuclein、ubiquitin、TH表達的情況。 研究結(jié)果：與大、小劑量組相比，中劑量組細胞的存活率顯著升高(P<0.01)；與正常組相比，lactacystin組細胞凋亡指數(shù)明顯增加(P<0.01)，a-synuclein、ubiquitin陽性細胞數(shù)亦均增多，而TH陽性細胞明顯減少；與lactacystin組相比，中藥組細

7、胞凋亡指數(shù)明顯降低，a-synuclein、ubiquitin陽性細胞數(shù)均減少，TH陽性細胞明顯增加(P<0.01)。 研究結(jié)論：lactacystin可抑制Pc12細胞泛素蛋白酶體系統(tǒng)的功能，引起細胞內(nèi)a-synuclein、ubiquitin聚集增多及TH陽性細胞數(shù)減少；并可上調(diào)PC12細胞的凋亡水平，而安顫靈含藥血清的作用機制可能在于：其能改善細胞UPS的功能、降低細胞內(nèi)a-synuclein的聚集、抑制TH表達的減少和細