1、目的：采用人胃癌細胞BGC-823作為體外實驗模型，再次驗證染料木素對人胃癌細胞的生長影響，并研究了Gen對腫瘤相關(guān)蛋白COX-2及其調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性變化，旨在探討將COX-2作為胃癌防治的一種新型靶點的可行性，并分析其可能的作用途徑，有望為將Gen用于胃癌防治提供實驗依據(jù)。 方法：⑴采用形態(tài)學觀察Gen處理前后細胞的形態(tài)學變化。⑵MTT檢測Gen對人胃癌細胞BGC-823的生長抑制作用。⑶流式細胞術(shù)分析了細胞周期分

2、布。⑷Hoechst染色和流式細胞術(shù)分析Gen對細胞的凋亡作用。⑸western blotting檢測藥物處理前后細胞中COX-2蛋白的表達情況。⑹ELISA法檢測轉(zhuǎn)錄因子NF-κB與DNA的結(jié)合活性。 結(jié)果：①Gen作用后倒置顯微鏡下觀察顯示，藥物作用組細胞數(shù)明顯減少，細胞皺縮、變圓、與鄰近細胞分離，多為單個分布，其中部分脫離培養(yǎng)板而呈漂浮狀。②MTT試驗結(jié)果顯示，Gen抑制人胃癌細胞BGC-823的生長，且呈濃度-時間依賴性

3、，72h半數(shù)抑制濃度約為100μM，與對照組相比，200μM的Gen抑制率達78.34±3.12％（p<0.05）。③流式細胞術(shù)對細胞周期情況進行分析的結(jié)果顯示，BGC-823細胞經(jīng)Gen處理后G0/G1期細胞明顯減少，G2期細胞明顯增加，S期細胞無明顯改變，表現(xiàn)出了G2/M期阻滯；且在不同藥物濃度下出現(xiàn)不同程度的凋亡峰。④應用Hoechst染色方法進一步檢測了藥物作用后細胞凋亡情況，與對照組相比，Gen作用后出現(xiàn)不同程度的凋亡細胞，與

4、流式細胞術(shù)的凋亡分析結(jié)果有較好的一致性。熒光顯微鏡下，藥物組可觀察到部分細胞凋亡的表現(xiàn)如細胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、邊集、核碎裂等細胞凋亡特征，而陰性對照組所有細咆染色均勻。⑤Gen作用后，BGC-823細胞中COX-2蛋白表達下調(diào)，NF-κB與DNA的結(jié)合活性也被抑制。⑥NF-κB的抑制劑PDTC不僅能夠抑制NF-κB的結(jié)合活性，而且能夠直接抑制COX-2的表達。 結(jié)論：Gen可通過誘導細胞凋亡和周期G2/M阻滯的方式抑制胃癌細胞B