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![Neuritin誘導MSCs向神經元樣細胞分化后的形態(tài)與標志物鑒定.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/19/12/1fa301aa-11ca-4c3c-9845-ff8f84377c9c/1fa301aa-11ca-4c3c-9845-ff8f84377c9c1.gif)
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文檔簡介
1、目的:
(1)探討體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓基質細胞(MSCs)的方法;
(2)建立Neuritin體外誘導大鼠MSCs分化為神經元樣細胞的最佳實驗條件;
(3)通過觀察Neuritin誘導后骨髓源性神經元樣細胞的形態(tài)以及標志物指標,評價Neuritin 誘導MSCs分化為神經元樣細胞的作用。
方法:
(1)采用全骨髓貼壁篩選法分離、培養(yǎng)、純化大鼠MSCs;
2、 (2)利用免疫熒光技術檢測大鼠MSCs表達表面標志物CD44/CD29/CD90/CD34/CD45的情況;
(3)分別于6小時、24小時、48小時、72小時,檢測不同濃度Neuritin誘導的骨髓源性神經元樣細胞的陽性率和細胞活力,確立Neuritin誘導大鼠MSCs分化為神經元樣細胞的最佳實驗條件;
(4)免疫熒光技術和Western blot技術檢測骨髓源性神經元樣細胞中神經細胞標志物(NSE)、神經
3、細胞樹突標記物(MAP-2)、星形膠質細胞標志物(GFAP)的定位和表達水平;
結果:
(1)應用全骨髓貼壁篩選法,在本實驗室培養(yǎng)條件下,建立了簡單、高效的MSCs的培養(yǎng)和分離方法;
(2)MSCs免疫熒光結果顯示:在本實驗室條件下培養(yǎng)的MSCs表達MSCs表面標志物CD29、CD44和CD90,不表達造血干細胞的表面標記物CD34、CD45。
(3)不同濃度Neuritin誘導M
4、SCs6小時、24小時、48小時、72小時,神經元樣細胞陽性率和細胞活力檢測結果顯示:0.25μg/ml組神經元樣細胞陽性率均明顯低于0.5μg/ml組,而0.5μg/ml組以上隨著Neuritin濃度增高,神經元樣細胞陽性率而呈下降趨勢,0.5μg/ml在誘導后24小時神經元樣細胞陽性最高;細胞活力隨時間延長而呈下降趨勢,24小時誘導組活細胞率均大于82%,其中0.25μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/mlNeuritin組細
5、胞活力大于對照組。故0.5μg/ml Neuritin誘導大鼠骨髓基質細胞24小時,其誘導效果最佳。
(4)0.5μg/ml Neuritin誘導MSCs24小時后的骨髓源性神經元樣細胞免疫熒光和Western Blot結果顯示:和對照組比較誘導組細胞定位于胞漿的神經細胞標志物(NSE)、神經細胞樹突標記(MAP-2)均有表達,定位于胞漿的星形膠質細胞標志物GFAP沒有表達;
結論:
(1)在本
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