1、目的：觀察不同傳代倍數(shù)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化后移植對(duì)認(rèn)知功能障礙大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的干細(xì)胞移植治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：BMSCs取自健康3月齡雄性Wistar大鼠股骨，全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代Wistar大鼠BMSCs。取第3代BMSCs用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD29、CD44、CD34以鑒定純

2、度。分別選取第3、4、5代BMSCs用含有20％胎牛血清的1mmol/LBME預(yù)誘導(dǎo)24h。去掉預(yù)誘導(dǎo)液后，加入20ng/mLbFGF進(jìn)行誘導(dǎo)分化48h。取誘導(dǎo)后的第3代BMSCs采用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)記神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)。自然衰老Wistar大鼠通過Morris水迷宮篩選后隨機(jī)分為4組，每組10只。對(duì)照組大鼠雙側(cè)海馬注入生理鹽水,3、4、5代細(xì)胞組大鼠分別注入向神

3、經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)后的3、4、5代BMSCs。大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力在移植前和實(shí)驗(yàn)后4周通過Morris水迷宮試驗(yàn)測(cè)定。采用免疫組織化學(xué)染色法觀察比較移植后各組大鼠海馬膽堿乙酰化酶(ChAT)陽性細(xì)胞數(shù)。
　　 結(jié)果：成功分離培養(yǎng)Wistar大鼠BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)記為：CD29(+)、CD44(+)、CD34(-)，符合BMSCs的表型特征。3、4、5代BMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后大部分分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，誘導(dǎo)后的第3代BMSCs采

4、用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定神經(jīng)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)記NSE表達(dá)陽性，GFAP表達(dá)陰性。Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果：與移植前相比，對(duì)照組大鼠學(xué)習(xí)記憶成績(jī)下降，但差異無顯著性(P＞0.05)；3、4、5代細(xì)胞組大鼠學(xué)習(xí)記憶成績(jī)均有提高(P＜0.05)。與對(duì)照組相比,3、4、5代細(xì)胞組大鼠學(xué)習(xí)記憶成績(jī)均有提高(P＜0.05)。3、4、5代細(xì)胞組兩兩比較，差異均有顯著性(P＜0.05)。移植后各組大鼠海馬ChAT陽性結(jié)果：與對(duì)照組相比,3、4、5代細(xì)胞組