1、目的：
　　 缺血性腦卒中已成為危害人類生命健康的重要疾病之一,而糖尿病患者發(fā)生缺血性腦卒中的風險較非糖尿病患者明顯增加,并且很多研究均證實糖尿病可加重缺血性腦卒中的病情及增加死亡率。內(nèi)皮祖細胞(endothelialprogenitor cells,EPCs)來源于骨髓干細胞,存在于外周血,成熟分化后變成內(nèi)皮細胞,對血管內(nèi)皮的損傷具有修復作用,并可在缺血組織的血管新生中起重要的作用。然而,外周血EPCs在腦卒中發(fā)生后外周血中的

2、改變情況,以及合并有糖尿病等高危因素時的改變情況尚無定論,以及外周血EPCs數(shù)量改變與卒中病情之間的關(guān)系有待進一步明確,且卒中對外周血EPCs數(shù)量的調(diào)控機制尚不明確。為此,本實驗應用正常大鼠和由1％鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液誘導的糖尿病大鼠,在不合并或合并局灶性腦缺血再灌注損傷的情況下,比較大鼠外周血EPCs數(shù)量的變化、腦組織損傷情況、及腦組織中VEGF、bFGF和eNOS表達;旨在探討正常和糖尿病大鼠發(fā)生局

3、灶性腦缺血再灌注損傷后外周血內(nèi)皮祖細胞數(shù)量變化及其意義和機制,為缺血性腦卒中的防治提供理論依據(jù)。
　　 方法
　　 (1)將健康成年雄性SD大鼠100只,隨機分為正常對照組(10只)、假手術(shù)組(10只)、腦缺血再灌注模型組(CIR組,30只)、糖尿病模型組(10只)、糖尿病假手術(shù)組(10只)和糖尿病合并CIR組(30只)。用1％STZ溶液,按照65mg/Kg給空腹大鼠單次左小腹腔注射復制1型糖尿病動物模型。采用線栓法阻塞

4、左側(cè)大腦中動脈建立大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型。
　　 (2)再灌注24 h后采用Longa5分制評分標準對各組大鼠進行神經(jīng)行為學評分(neurologic deficit score,NDS)。
　　 (3)再灌注24h后,各組大鼠麻醉成功后,眼眶靜脈取血,抗凝后行流式細胞儀技術(shù)測定外周血EPCs數(shù)量。
　　 (4)再灌注24h后,每組各取5只大鼠,麻醉成功后斷頭取腦,取新鮮腦組織切成2mm厚腦片放入1％濃度

5、2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)溶液中染色,計算腦梗死體積。
　　 (5)其余大鼠于再灌注24h后10％水合氯醛腹腔麻醉成功后,左心室插管,4％多聚甲醛灌流,斷頭取腦,固定,浸蠟,包埋,連續(xù)切片,采用免疫組化方法分析腦組織中VEGF、bFGF和eNOS陽性表達的分布和變化規(guī)律。
　　 (6)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,計量資料采用

6、均數(shù)±標準差((x)±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用t檢驗。統(tǒng)計處理多組間比較采用方差分析,2組均數(shù)間比較采用q檢驗,取P＜0.05作為顯著性檢驗標準。
　　 結(jié)果
　　 (1)正常大鼠和糖尿病大鼠的一般情況糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿及體重減輕等糖尿病的典型癥狀,造模成功后,糖尿病模型組大鼠質(zhì)量[(196.7±8.6)g]明顯低于正常對照組[(250.8±17.7)g];其血糖[(32.

7、2±6.4)mmol/L]明顯高于正常對照組[(4.4±0.7)mmol/L](P＜0.01)。
　　 (2)各組大鼠NDS評分正常對照組、假手術(shù)組、糖尿病模型組、糖尿病假手術(shù)組均未見明顯神經(jīng)功能損害,NDS評分均為0分,糖尿病合并CIR組神經(jīng)功能評分[(2.8±1.0)分]明顯高于CIR模型組[(1.5±0.3)分](P＜0.05)。
　　 (3)各組大鼠腦組織TTC染色結(jié)果非梗死區(qū)腦組織被染成紅色,梗死區(qū)呈現(xiàn)白色,且

8、梗死區(qū)與大腦中動脈供血分布區(qū)域相一致。糖尿病合并CIR組腦梗死體積為[(464.1±169.3)mm3]明顯大于CIR模型組[(101.3±57.4)mm3],兩組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 (4)外周血EPCs數(shù)量與正常對照組及假手術(shù)組比較,CIR模型組大鼠外周血EPCs數(shù)量明顯增加,糖尿病模型組、糖尿病假手術(shù)組及糖尿病合并CIR組大鼠外周血EPCs數(shù)量明顯減少;與糖尿病模型組比較,糖尿病合并CIR組大鼠外周血E

9、PCs數(shù)量明顯減少(均P＜0.01)。
　　 (5)腦組織免疫組化結(jié)果與正?？瞻讓φ战M和假手術(shù)組比較,CIR組腦組織中神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞表達的VEGF、星形細胞和內(nèi)皮細胞表達的bFGF,以及內(nèi)皮細胞表達的eNOS含量明顯增加;糖尿病空白對照組和糖尿病假手術(shù)組相應細胞無明顯著色;糖尿病合并CIR組VEGF、bFGF和eNOS含量略高于糖尿病空白對照組和糖尿病假手術(shù)組(均P＜0.01)。
　　 結(jié)論
　　 (1)C

10、IR組大鼠外周血EPCs數(shù)量增加,有助于修復血管及保護受損腦組織。
　　 (2)糖尿病大鼠外周血EPCs數(shù)量明顯減少,且合并CIR后減少更甚。
　　 (3)外周血EPCs數(shù)量的檢測可能有助于CIR病情及預后的評估。
　　 (4)正常大鼠發(fā)生急性腦梗死后,腦組織合成大量的VEGF、bFGF和eNOS,促進骨髓中的EPCs動員至外周血,增強血管發(fā)生保護缺血損傷腦組織。
　　 (5)糖尿病大鼠外周血EPCs數(shù)量